QuickEasyᵀᴹ Real Time PCR Kit-Taqman
Popisy
2× QuickEasyTMReal PCR Mix-Taqman od QuickEasyTMReal Time PCR Kit-Taqman kit je systém základnej zmesi novej generácie navrhnutý pre amplifikačnú reakciu Real Time PCR s použitím špecifických fluorescenčných sond.Jeho jadro Foregene HS Taq DNA Polymerase je založené na modifikácii protilátky, používanej v spojení s Foregene ďalej optimalizovaným PCR systémom, má vyššiu špecifickosť a účinnosť amplifikácie.V porovnaní s bežnou PCR zmesou má silnejšiu amplifikačnú schopnosť a nižšiu mieru nesúladu.Môže sa použiť vo fluorescenčnej kvantitatívnej PCR reakcii na zníženie nešpecifickej amplifikácie a zlepšenie presnosti PCR.Môže výrazne zlepšiť špecifickosť produktu a citlivosť na reakcie.Súčasne bol poskytnutý ROX ako interné referenčné farbivo.
QuickEasyTMReal Time PCR Kit-Taqman kit má široký rozsah použitia na množstvo templátu a môže získať dobrú štandardnú krivku v rôznych kvantitatívnych oblastiach a môže presne kvantifikovať a detegovať cieľové gény s dobrou opakovateľnosťou a vysokou spoľahlivosťou.
technické údaje
200 príprav,500 príprav,1000 príprav,2000 príprav
Komponenty súpravy
QuickEasyTMReal Time PCR Kit-Taqman(20μlsystému) | ||||
Obsah súpravy | QP-01121 | QP-01122 | QP-01123 | QP-01124 |
200 príprav | 500 príprav | 1000 príprav | 2000 príprav | |
2×RýchloJednoduchéTM Skutočná PCR Zmiešať- Taqman | 1 ml×2 | 1,7 ml×3 | 1,7 ml×6 | 1,7 ml×12 |
20×Referenčné farbivo ROX | 200μL | 0,5 ml | 1 ml | 1 ml×2 |
ddH bez DNázy2O | 1,7 ml | 1,7 ml×2 | 10 ml | 20 ml |
AK TY | 1kus | 1kus | 1kus | 1kus |
Vlastnosti a výhody
■ Jedinečný systém optimalizácie PCR robí 2×QuickEasyTMReal PCR Mix-Taqman kompatibilnejší.
■ Hot-start Foregene HS Taq Polymerase má vyššiu účinnosť amplifikácie, vyššiu amplifikačnú citlivosť a vyššiu amplifikačnú špecifickosť.
■ 2× QuickEasyTM Real PCR Mix -Taqman využíva jedinečný systém optimalizovaný spoločnosťou Foregene na zlepšenie citlivosti a špecifickosti detekcie sekvenčne špecifickej sondy, ktorú možno použiť na genotypizáciu a určenie variácií počtu kópií a získať presné výsledky.
■ Tento produkt sa dodáva s interným referenčným farbivom ROX, ktoré možno použiť na odstránenie pozadia signálu a chyby signálu medzi jamkami, čo je pre zákazníkov výhodné na použitie v rôznych typoch kvantitatívnych PCR prístrojov.
Aplikácia súpravy
■ Fluorescenčná kvantitatívna PCR pre templátovú kvantitatívnu analýzu;
■ Ckonvenčná PCR amplifikácia;
■ Môže byť použitý na detekciu alel.
Skladovanie a trvanlivosť
Súprava by sa mala skladovať pri teplote -20 °C v tme;ak sa používa často, môže sa tiež krátkodobo uchovávať pri teplote 4 °C (spotrebujte do 10 dní).
Princípy návrhu primérov PCR v reálnom čase
Forward Primer a Reverse Primer
Pre Real Time PCR je veľmi dôležitý návrh priméru.Priméry súvisia so špecifickosťou a účinnosťou amplifikácie PCR a môžu byť navrhnuté s odkazom na nasledujúce princípy:
Dĺžka priméru: 18-30 bp.
Obsah GC: 40-60 %.
Hodnota Tm: Softvér na návrh základného náteru, ako napríklad Primer 5, môže poskytnúť hodnotu Tm základného náteru.Hodnoty Tm upstream a downstream primérov by mali byť čo najbližšie.Môže sa použiť aj vzorec na výpočet Tm: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Pri vykonávaní PCR sa ako teplota nasadenia vo všeobecnosti vyberie teplota pod hodnotou Tm priméru 5 °C (zodpovedajúce zvýšenie teploty nasadenia môže zvýšiť špecifickosť reakcie PCR).
Priméry a produkty PCR:
Dĺžka produktu amplifikácie PCR priméru je výhodne 100 až 150 bp.
Navrhovaným základným náterom v sekundárnej štruktúrnej oblasti šablóny by ste sa mali čo najviac vyhnúť.
Vyhnite sa tvorbe 2 alebo viacerých komplementárnych báz medzi 3' koncami upstream a downstream primérov.
Primer 3′ terminálová základňa nemôže byť prítomná s 3 dodatočnými po sebe idúcimi G alebo C.
Priméry samotné nemôžu mať komplementárne štruktúry, inak sa vytvorí vlásenková štruktúra, ktorá ovplyvňuje PCR amplifikáciu.
ATCG by sa malo distribuovať čo najrovnomernejšie v sekvencii primérov a 3 'terminálna báza by sa mala vyhnúť ako T.
Príloha 1:Doplnkový balík komponentov súpravy Cell Direct RT-qPCR
1.Roztok na bunkovú lýzu
| |||
Komponenty súpravy (24-jamkový lýzový systém / jamka) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
100 T | 500 T | ||
Časťja | Pufr CL | 20 ml | 100 ml |
Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
Buffer ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
ČasťII | DNA Eraser | 400 μl | 1 ml × 2 |
2.RT Mix
| |
Komponenty súpravy (20 μl reakčného systému) | DRT-01011-B1 |
200 T | |
5× Direct RT Mix | 800 μl |
ddH bez RNázy2O | 1,7 ml × 2 |
| ||
Komponenty súpravy (20 μl reakčného systému) | DRT-01011-C1 | DRT-01011-C2 |
200 T | 1000 T | |
2× Direct qPCR Mix-SYBR | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
50× referenčné farbivo ROX | 40 μl | 200 μl |
ddH bez RNázy2O | 1,7 ml | 10 ml |