Súprava na izoláciu bukálneho výteru/FTA karty DNA súprava na extrakciu alebo purifikáciu genómovej DNA z bukálnych výterov
Popis súpravy:
Rýchlo čistite vysokokvalitnú genómovú DNA zo vzoriek bukálnych tampónov/FTA karty.
◮Žiadna kontaminácia RNázou:Stĺpec DNA-Only, ktorý je súčasťou súpravy, umožňuje odstrániť RNA z genómovej DNA bez pridania RNázy počas experimentu, čím sa zabráni kontaminácii laboratória exogénnou RNázou.
◮Vysoká rýchlosť:Foregene Protease má vyššiu aktivitu ako podobné proteázy a rýchlo trávi vzorky tkaniva;operácia je jednoduchá a operácia extrakcie genómovej DNA môže byť dokončená do 20-80 minút.
◮Pohodlné:Odstreďovanie sa uskutočňuje pri teplote miestnosti a nie je potrebné odstreďovanie pri nízkej teplote pri 4 °C alebo zrážanie DNA etanolom.
◮Bezpečnosť:Nie je potrebná extrakcia organickým činidlom.
◮Vysoká kvalita:Extrahovaná genómová DNA má veľké fragmenty, žiadnu RNA, žiadnu RNázu a extrémne nízky obsah iónov, čo môže spĺňať požiadavky rôznych experimentov.
◮Mikroelučný systém:Môže zvýšiť koncentráciu genómovej DNA, čo je vhodné pre následnú detekciu alebo experiment.
Popis
Táto súprava poskytuje účinnú a rýchlu metódu na získanie vysoko koncentrovanej genómovej DNA z bukálnych výterov a FTA karty (krvné škvrny).Pomocou našej spoločnosti'Jedinečná odstredivá kolóna a vzorec s kremičitou membránou obsahujúcou iba DNA v kombinácii s Foregene Proteázou, vysoko koncentrovaná a vysokokvalitná genómová DNA môže byť extrahovaná za 80 minút.Špeciálne navrhnutá malá purifikačná kolóna viaže genómovú DNA a DNA môže byť eluovaná malým množstvom (15 μl) elučný systém na zvýšenie koncentrácie získanej genómovej DNA, ktorý je vhodný pre následnú detekciu alebo experiment.Súprava môže spracovať jednu alebo viac vzoriek naraz a proces čistenia nevyžaduje extrakciu organických látok, ako je fenol, chloroform a časovo náročné zrážanie izopropanolom alebo etanolom, a prevádzka je jednoduchá a časovo nenáročná.
technické údaje
50 príprav
Komponenty súpravy
| Buffer ST1 |
| Buffer ST2 |
| Lineárny akrylamid |
| Buffer PW |
| Buffer WB |
| Pufr EB |
| Foregene Protease |
| Stĺpec iba pre DNA |
| Inštrukcie |
Vlastnosti a výhody
-Žiadna kontaminácia RNázou: Stĺpec len pre DNA, ktorý je súčasťou súpravy, umožňuje odstrániť RNA z genómovej DNA bez pridania RNázy počas experimentu, čím sa zabráni kontaminácii laboratória exogénnou RNázou.
-Vysoká rýchlosť: Foregene Protease má vyššiu aktivitu ako podobné proteázy, rýchlo trávi vzorky;jednoduchá obsluha.
-Pohodlné: Odstreďovanie sa vykonáva pri teplote miestnosti a nie je potrebné odstreďovanie pri nízkej teplote pri 4 °C alebo zrážanie DNA etanolom.
-Bezpečnosť: Nevyžaduje sa extrakcia organickým činidlom.
-Vysoká kvalita: Extrahovaná genómová DNA má veľké fragmenty, žiadnu RNA, žiadnu RNázu a extrémne nízky obsah iónov, čo môže spĺňať požiadavky rôznych experimentov.
-Mikro-elučný systém: Môže zvýšiť koncentráciu genómovej DNA, čo je vhodné pre následnú detekciu alebo experiment.
Aplikácia súpravy
Je vhodný na purifikáciu genómovej DNA z nasledujúcich vzoriek: bukálne výtery, FTA karta (krvné škvrny).
Skladovanie a trvanlivosť
-Túto súpravu možno skladovať 12 mesiacov v suchom prostredí pri izbovej teplote (15-25°C);pri dlhšom skladovaní možno skladovať pri 2-8°C.
Poznámka: Pri skladovaní pri nízkej teplote je roztok náchylný na zrážanie.Pred použitím sa uistite, že ste roztok umiestnili do súpravy na určitý čas pri izbovej teplote.V prípade potreby ho predhrejte vo vodnom kúpeli s teplotou 37 °C počas 10 minút, aby sa zrazenina rozpustila, a pred použitím premiešajte.
-Foregene Protease roztok má unikátne zloženie, ktoré je aktívne pri dlhodobom skladovaní pri izbovej teplote (3 mesiace);jeho aktivita a stabilita bude lepšia pri skladovaní pri 4°C, preto sa odporúča skladovať pri 4°C, pamätajte, že ho neuchovávajte pri -20°C.
Čistiaci stĺpec je upchatý
V tejto súprave sa pri operácii extrakcie genómovej DNA purifikačná kolóna priamo adsorbuje na zmes enzymatickej lýzy vzorky bez kroku centrifugácie a purifikačná kolóna môže byť zablokovaná v dôsledku neúplnej enzymizácie a vysokej viskozity vzorky.
Nasledujúce možné príčiny sú nasledovné:
1. Neúplné enzymatické štiepenie vzoriek tkaniva.
Odporúčanie: Čas spracovania vzorky Foregene Protease môže byť primerane predĺžený alebo sa môže supernatant odobrať po centrifugácii pri 12 000 ot./min (~13 400 × g) počas 5 minút.
2. Nadmerné používanie vzoriek tkaniva alebo veľkých tkanív.
Odporúčanie: Najlepšie je neprekročiť 1 bukálny tampón vo vzorke;ak je vzorka príliš veľká, podľa toho zvýšte dávku pufra ST1, foregenovej proteázy, pufra ST2.
3. Viskozita vzorky je príliš vysoká.
Odporúčanie: Vzorky možno pred extrakciou genómovej DNA vhodne zriediť 10 mM Tris-HCl.
4. Fragmenty krvnej karty boli odsaté.
Odporúčanie: Čas prechodného odstreďovania v kroku 6 extrakcie genómu krvných škvŕn (FTA Card) možno primerane predĺžiť.
Nízky výťažok alebo žiadna DNA
Často existuje množstvo faktorov, ktoré ovplyvňujú výťažok genómovej DNA, vrátane pôvodu vzorky, podmienok skladovania vzorky, prípravy vzorky, manipulácie atď.
Počas extrakcie nie je možné získať genómovú DNA
Možné príčiny sú nasledovné:
1. Nesprávne uchovávanie vzoriek alebo príliš dlhé skladovanie vedie k degradácii genómovej DNA.
Odporúčanie: Z ústnych tampónov by sa mali prednostne odoberať čerstvé vzorky a neodporúča sa používať konzervované tampóny na operácie extrakcie genómovej DNA;vzorky krvných škvŕn by mali zabezpečiť, aby bola kvalita kvalifikovaná a doba skladovania by nemala byť príliš dlhá.
2. Príliš malé využitie tkaniva nemusí viesť k žiadnej extrakcii zodpovedajúcej genómovej DNA.
Odporúčanie: Postupujte podľa pokynov na odber vzoriek bukálneho výteru v prevádzkovej príručke a utrite toľkokrát, ako je to možné, aby sa na ústny tampón mohol pripojiť dostatok buniek na extrakciu genómovej DNA;na extrakciu vzorky krvnej škvrny je možné plochu rezu krvnej škvrny primerane zväčšiť.
3. Foregénna proteáza je nesprávne konzervovaná, čo vedie k zníženiu jej aktivity alebo inaktivácii.
Odporúčanie: Potvrďte podmienky skladovania Foregene proteázy alebo ju nahraďte novou Foregene proteázou pre enzymatickú reakciu.
4. Nesprávne uchovávanie súpravy alebo doba skladovania je príliš dlhá, čo má za následok zlyhanie niektorých komponentov súpravy.
Odporúčanie: Kúpte si novú súpravu na izoláciu DNA bukálneho výteru pre súvisiace postupy.
5. Pufer WB nepridáva absolútny etanol.
Odporúčanie: Uistite sa, že tlmivý roztok WB pridáva správny objem absolútneho etanolu.
6. Eluent nie je správne pridaný do silikónového filmu.
Odporúčanie: Pridajte na 65 °C predhriate kvapky elučného činidla do stredu silikónovej membrány a nechajte pri izbovej teplote 5 minút, aby sa zvýšila účinnosť elúcie.
Izolovaná genómová DNA s nízkym výťažkom
Nasledujúce možné príčiny sú nasledovné:
1. Nesprávne uchovávanie vzoriek alebo príliš dlhé skladovanie vedie k degradácii genómovej DNA.
Odporúčanie: Z ústnych tampónov sa prednostne odoberajú čerstvé vzorky a konzervované tampóny by sa nemali používať na extrakciu genómovej DNA.
2. Ak je množstvo vzorky tkaniva príliš malé, obsah extrahovanej genómovej DNA bude nižší.
Odporúčanie: Postupujte podľa pokynov na odber vzoriek z ústneho tampónu v prevádzkovej príručke a utrite ich toľkokrát, koľkokrát je to možné, aby sa na ústny tampón mohol pripojiť dostatok buniek na extrakciu genómovej DNA.
3. Foregénna proteáza je nesprávne konzervovaná, čo vedie k zníženiu jej aktivity alebo inaktivácii.
Odporúčanie: Potvrďte podmienky skladovania Foregene proteázy alebo ju nahraďte novou Foregene proteázou pre enzymatickú reakciu.
4. Problémy s eluentmi.
Odporúčanie: Na elúciu použite pufer EB;ak používate ddH2O alebo iné eluenty, potvrďte, že pH eluátu je medzi 7,0-8,5.
5. Eluát nie je správne pridaný po kvapkách.
Odporúčanie: Pridajte kvapky eluentu do stredu silikónovej membrány a nechajte pri izbovej teplote 5 minút, aby sa zvýšila účinnosť elúcie.
6. Elučná kvapalina sa hromadí príliš málo.
Odporúčanie: Na elúciu genómovej DNA použite eluent, ako sa vyžaduje v pokynoch, najmenej 15 μl.
Izolovaná genómová DNA s nízkou čistotou
Nízka čistota genómovej DNA môže viesť k zlyhaniu alebo neuspokojivým výsledkom následných experimentov, ako napríklad: enzýmy nemožno rozrezať, PCR nemôže získať požadovaný génový fragment atď.
Možné príčiny sú nasledovné:
1. Heteroproteínové znečistenie, znečistenie RNA.
Analýza: Purifikačná kolóna nebola premytá použitím pufra PW;Premývacia purifikačná kolóna Buffer PW nebola premytá správnou rýchlosťou odstredenia.
Odporúčanie: Pred pridaním etanolu sa uistite, že v supernatante nie je žiadna zrazenina;nezabudnite premyť čistiacu kolónu podľa pokynov a tento krok nemožno vynechať.
2. Znečistenie iónmi nečistôt.
Analýza: Premývacia kolóna na čistenie pufra WB bola vynechaná alebo bola premytá iba raz, čo viedlo k zvyškovej iónovej kontaminácii.
Odporúčanie: Buffer WB premyte 2-krát podľa pokynov, aby ste čo najviac odstránili zvyškové ióny.
3. Kontaminácia enzýmom RNA.
Analýza: Cudzie RNázy sa pridali do pufra;Operácia premývania pufra PW bola nesprávna, čo viedlo k RNázovým zvyškom, ktoré ovplyvnili následné experimentálne operácie RNA, ako je in vitro transkripcia.
Odporúčanie: Súpravy na izoláciu nukleových kyselín série Foregene môžu odstrániť RNA bez dodatočného pridania RNázy, takže súprava na izoláciu DNA bukálnych výterov/FTA karty nemusí pridávať RNázu;určite postupujte podľa pokynov pre premývaciu čistiacu kolónu Buffer PW a tento krok nemožno vynechať.
4. Etanolový zvyšok.
Analýza: Buffer WB nevykonal centrifugáciu v prázdnej skúmavke po premytí purifikačnej kolóny.
Odporúčanie: Vykonajte správnu operáciu odstreďovania prázdnej skúmavky podľa pokynov.
5. Iné znečistenie nečistotami.
Analýza: Uložené vzorky alebo špeciálne vzorky nie sú vopred upravené.
Odporúčanie: Dôkladne predbežne upravte vzorku podľa pokynov.
