Súprava na izoláciu zvieracej celkovej RNA Súpravy na extrakciu a čistenie celkovej RNA pre živočíšne tkanivá a bunky
Popis súpravy:
Rýchlo a efektívne extrahujte vysoko čistú a kvalitnú celkovú RNA z rôznych živočíšnych tkanív.
Netreba sa obávať degradácie RNA.Celý systém je bez RNázy
Účinne odstráňte DNA pomocou kolóny na čistenie DNA
Odstráňte DNA bez pridania DNázy
Jednoduché – všetky operácie sú dokončené pri izbovej teplote
Rýchla – operácia môže byť dokončená za 30 minút
Bezpečné – nepoužíva sa žiadne organické činidlo
Vysoká čistota — OD260/280≈1,8-2,1
Popisy súprav
50 príprav, 200 príprav
Táto súprava využívaspinový stĺpec a vzorecvyvinutá našou spoločnosťou, ktorá dokáže extrahovať vysoko čistú a kvalitnú celkovú RNA z rôznych živočíšnych tkanív s vysokou účinnosťou. Poskytuje efektívnu kolónu na čistenie DNA, ktorá dokáže jednoducho a časovo nenáročne oddeliť a adsorbovať genómovú DNA zo supernatantu a tkanivového lyzátu;RNA-only Column dokáže efektívne viazať RNA a môže byť spracovaný súčasne s jedinečným vzorcom Množstvo vzoriek.
Celý systém je bez RNázy, takže extrahovaná RNA nie je degradovaná;Buffer RW1, Buffer RW2 systém premývania pufra, takže získaná RNA je bez znečistenia proteínmi, DNA, iónmi a organickými zlúčeninami.
Komponenty súpravy
| Súprava na izoláciu zvieracej celkovej RNA | ||
| Komponenty súpravy | RE-03011 | RE-03014 |
| 50 T | 200 T | |
| Buffer RL1* | 25 ml | 100 ml |
| Pufr RL2 | 15 ml | 60 ml |
| Buffer RW1* | 25 ml | 100 ml |
| Buffer RW2 | 24 ml | 96 ml |
| ddH20 bez RNázy | 10 ml | 40 ml |
| Stĺpec len RNA | 50 | 200 |
| stĺpec na čistenie DNA | 50 | 200 |
| Návod na použitie | 1 kus | 1 kus |
Informácie o produkte
| Formátovať | Otočný stĺpec | Čistiaci komponent | Foregenová kolóna, činidlo |
| Flux | 1-24 vzoriek | Čas na prípravu | ~30 minút (24 vzoriek) |
| Odstredivka | Stolová odstredivka | Separácia pyrolýzou | Odstredivá separácia |
| Ukážka | Živočíšne tkanivo;bunka | Množstvo vzoriek | Tkanivo: 10-20 mg;Bunka: (1-5) × 106 |
| Elučný objem | 50-200 ul | Maximálny objem nakladania | 850 ul |
Vlastnosti a výhody
■ Netreba sa obávať degradácie RNA;celý systém je bez RNázy
■ Účinne odstráňte DNA pomocou kolóny na čistenie DNA
■ Odstráňte DNA bez pridania DNázy
■ Jednoduché všetky operácie sa vykonávajú pri izbovej teplote
■ Rýchla prevádzka môže byť dokončená za 30 minút
■ Bezpečné – nevyžaduje sa žiadne organické činidlo
■ Vysoká čistota -OD260/280≈1,8-2,1
Aplikácia súpravy
Je vhodný na extrakciu a purifikáciu celkovej RNA z rôznych čerstvých alebo mrazených živočíšnych tkanív alebo kultivovaných buniek.
Parametre produktu
■ Následné aplikácie: syntéza prvého vlákna cDNA, RT-PCR, molekulárne klonovanie, Northern Blot atď.
■ Vzorky: živočíšne tkanivá, kultivované bunky
■ Dávkovanie: tkanivá 10-20 mg, bunky (2-5)×106
■ Maximálna väzbová kapacita DNA purifikačnej kolóny: 80 μg
■ Elučný objem: 50-200 μl
Diagram
Animal Total RNA Isolation Kit ošetrené 20 mg
Čerstvé vzorky myší, odoberte 5 % purifikovanej celkovej RNA 1 % agaru
Glykogélová elektroforéza
1: Slezina 2: Obličky
3: Pečeň 4: Srdce
Skladovanie a trvanlivosť
Súpravu možno skladovať 24 mesiacov pri izbovej teplote (15–25 ℃) alebo 2–8 ℃ dlhšie.Po pridaní β-merkaptoetanolu (voliteľné) je možné tlmivý roztok RL1 skladovať pri 4 °C počas 1 mesiaca.
Citované články
1.IF:18.808:Zheng, Q., Qin, F., Luo, R., a kol.Lipidom naplnené nanočastice s obsahom mRNA na úpravu pečeňovej bázy prostredníctvom optimalizácie centrálneho kompozitného dizajnu.Adv.Funkcia.Mater.2021, 31, 2011068.doi:10.1002/adfm.202011068.
2.IF:18.187:He X, Hong W, Yang J a kol.Spontánna apoptóza buniek v terapeutickom prípravku kmeňových buniek má imunomodulačné účinky prostredníctvom uvoľňovania fosfatidylserínu.Signal Transduct Target Ther.14. júla 2021; 6 (1): 270.doi: 10.1038/s41392-021-00688-z.
3.IF:17,97:Dai Z, Liu H, Liao J, a kol.Modifikácia tRNA N7-metylguanozínu zvyšuje onkogénnu transláciu mRNA a podporuje progresiu intrahepatálneho cholangiokarcinómu.Mol Cell.29. júla 2021:S1097-2765(21)00555-4.doi: 10.1016/j.molcel.2021.07.003.
4.IF: 9,225: Cao X, Shu Y, Chen Y a kol.Modifikácia m6A sprostredkovaná Mettl14 uľahčuje regeneráciu pečene udržiavaním homeostázy endoplazmatického retikula.Cell Mol Gastroenterol Hepatol.2021;12(2):633-651.doi: 10.1016/j.jcmgh.2021.04.001.
RNA izolačné súpravy pre iné vzorové zdrojesú k dispozícii:
Bunka, rastlina, vírus, krv atď.
RNA sa neextrahuje alebo výťažky RNA sú nízke
Často existuje množstvo faktorov, ktoré ovplyvňujú účinnosť regenerácie, ako napríklad: obsah RNA vzorky tkaniva, spôsob operácie, elučný objem atď.
1. Ľadový kúpeľ alebo kryogénna (4 °C) centrifugácia bola vykonaná počas prevádzky.
Odporúčanie: Pracujte pri izbovej teplote (15-25°C) počas celého procesu, nepoužívajte ľadový kúpeľ a odstreďujte pri nízkych teplotách.
2. Nesprávne uchovávanie vzorky alebo príliš dlhý čas skladovania vzorky.
Odporúčanie: Vzorky skladujte pri -80 °C alebo zmrazte v tekutom dusíku a vyhnite sa opakovanému použitiu zmrazovania a rozmrazovania;skúste použiť čerstvé tkanivo alebo kultivované bunky na extrakciu RNA.
3. Nedostatočná lýza vzorky.
Odporúčanie: Pri homogenizácii tkaniva sa uistite, že tkanivo je dostatočne homogenizované a že tkanivové bunky sú dostatočne rozdelené na vysvetlenie uvoľňovania RNA.
4. Eluent nie je pridaný správne.
Odporúčanie: Potvrďte, že ddH bez RNázy2O sa pridáva po kvapkách do stredu membrány čistiacej kolóny.
5. Do pufra RL2 alebo pufra RW2 sa nepridal správny objem absolútneho etanolu.
Odporúčanie: Postupujte podľa pokynov, pridajte správny objem absolútneho etanolu do pufra RL2 a pufra RW2 a pred použitím súpravy dobre premiešajte.
6. Dávkovanie vzorky tkaniva nie je vhodné.
Odporúčanie: Použite 10-20 mg tkaniva alebo (1-5) × 106buniek na 500 μl pufra RL1, pretože nadmerné používanie tkaniva môže viesť k zníženej extrakcii RNA.
7. Nesprávny elučný objem alebo neúplná elúcia.
Odporúčanie: Elučný objem purifikačnej kolóny je 50-200 μl;ak elučný efekt nie je uspokojivý, odporúča sa predĺžiť čas umiestnenia pri izbovej teplote po pridaní predhriateho ddH bez RNázy2O, napr. 5-10 min.
8. Čistiaci stĺpec obsahuje etanolový zvyšok po premytí pufrom RW2.
Odporúčanie: Ak po premytí pufra RW2 zostane etanolový zvyšok, odstreďovanie prázdnej skúmavky po dobu 1 minúty, čas operácie odstreďovania prázdnej skúmavky sa môže predĺžiť na 2 minúty alebo sa môže čistiaca kolóna umiestniť na 5 minút pri izbovej teplote, aby sa adekvátne odstránil zvyškový etanol.
Purifikovaná RNA je degradovaná
Kvalita purifikovanej RNA súvisí s faktormi, ako je konzervácia vzorky, kontaminácia RNázou a manipulácia atď.
1. Vzorky tkaniva nie sú uchovávané včas.
Odporúčanie: Ak sa vzorky tkaniva alebo bunky nepoužijú včas po odbere, ihneď ich kryokonzervujte pri -80 °C alebo v tekutom dusíku.Ak chcete extrahovať RNA, vždy, keď je to možné, použite novo odobranú vzorku tkaniva alebo buniek.
2. Opakované zmrazenie a rozmrazenie vzoriek tkaniva.
Odporúčanie: Pri skladovaní vzoriek tkaniva je najlepšie ich rozrezať na malé kúsky kvôli konzervácii a pri použití jeden z nich odstrániť, aby sa predišlo opakovanému zmrazeniu a rozmrazeniu vzorky a degradácii RNA.
3. Počas operácie je zavedená RNáza alebo nepoužívanie jednorazových rukavíc, masiek atď.
Odporúčanie: Experimenty s extrakciou RNA sa najlepšie vykonávajú v oddelených miestnostiach na manipuláciu s RNA a pred experimentom sa stôl vyčistí.
Počas experimentu noste jednorazové rukavice a masky, aby ste minimalizovali degradáciu RNA spôsobenú zavedením RNázy.
4. Reagencie sú počas používania kontaminované RNázou.
Odporúčanie: Vymeňte za novú súpravu na izoláciu zvieracej celkovej RNA pre súvisiace experimenty.
5. Centrifugačné skúmavky, hroty atď. používané pri manipulácii s RNA sú kontaminované RNázou.
Odporúčanie: Uistite sa, že všetky centrifugačné skúmavky, hroty, pipety atď. používané pri extrakcii RNA neobsahujú RNázu.
Purifikovaná získaná RNA ovplyvňuje následné experimenty
RNA purifikovaná na purifikačnej kolóne, ak sú ióny solí, obsah proteínu príliš veľký, ovplyvní následný experiment, ako napríklad: reverzná transkripcia,Northern Blot et al.
1. Eluovaná RNA má zvyšky soľných iónov.
Odporúčanie: Potvrďte, že do pufra RW2 bol pridaný správny objem etanolu a vykonajte 2 premytia kolóny pri odstredivej rýchlosti uvedenej pre operáciu;ak sú prítomné nejaké zvyšky soľných iónov, ponechajte čistiacu kolónu v pufri RW2 počas 5 minút pri teplote miestnosti a vykonajte centrifugáciu, aby ste maximalizovali odstránenie kontaminácie soľou.
2. Etanolový zvyšok v eluovanej RNA.
Odporúčanie: Potvrďte, že po premytí pufra RW2 vykonajte operáciu odstreďovania prázdnej skúmavky pri rýchlosti odstreďovania uvedenej pre prevádzku, predĺžte čas operácie odstreďovania prázdnej skúmavky na 2 minúty, ak sú v ňom ešte zvyšky etanolu, alebo po odstredení prázdnej skúmavky nechajte 5 minút pri izbovej teplote, aby sa maximalizovalo odstránenie zvyškov etanolu.
