Plant Total RNA Isolation Kit Plus Total RNA Purificaiton Kit pre rastliny bohaté na polysacharidy a polyfenoly
Popis súpravy:
Kat.č.RE-05021/05022/05024
Na čistenie celkovej RNA zo všeobecných vzoriek rastlín obsahujúcich vysoký podiel polysacharidov a polyfenolových zložiek.
Rýchlo extrahujte kvalitnú celkovú RNA zo vzoriek rastlín s vysokým obsahom polysacharidov a polyfenolov.
Bez obsahu RNázy pomocou kolóny na čistenie DNA
Jednoduché – všetky operácie sú dokončené pri izbovej teplote
Rýchla – operácia môže byť dokončená za 30 minút
Bezpečné – nepoužíva sa žiadne organické činidlo 
technické údaje
50 príprav, 200 príprav
Súprava využíva spinovú kolónu a receptúru vyvinutú spoločnosťou Foregene, ktorá dokáže efektívne extrahovať vysoko čistú a kvalitnú celkovú RNA z rôznych rastlinných tkanív s vysokým obsahom polysacharidov alebo polyfenolov.Poskytuje kolónu na čistenie DNA, ktorá dokáže ľahko odstrániť genómovú DNA zo supernatantu a tkanivového lyzátu.Kolóna obsahujúca iba RNA môže účinne viazať RNA.Súprava dokáže spracovať veľké množstvo vzoriek súčasne.
Celý systém neobsahuje RNázu, takže purifikovaná RNA nebude degradovaná.Pufer PRW1 a Pufer PRW2 môžu zabezpečiť, že získaná RNA nie je kontaminovaná proteínom, DNA, iónmi a organickými zlúčeninami.
Komponenty súpravy
| Buffer PSL1, Buffer PS, Buffer PSL2 |
| Pufer PRW1, Pufer PRW2 |
| ddH bez RNázy2O, stĺpec na čistenie DNA |
| RNA-Len stĺpec |
Vlastnosti a výhody
■ Prevádzka pri izbovej teplote (15-25 °C) počas celého procesu, bez ľadového kúpeľa a nízkoteplotného odstreďovania.
■ Kompletná súprava bez RNázy, nemusíte sa obávať degradácie RNA.
■ Zvlášť vhodné na čistenie RNA z rastlinných vzoriek polysacharidov a polyfenolov.
■ DNA-Cleaning Column sa špecificky viaže na DNA, takže súprava môže odstrániť kontamináciu genómovou DNA bez pridania DNázy.
■ Vysoký výťažok RNA: RNA-only Stĺpec a jedinečný vzorec môžu účinne čistiť RNA.
■ Vysoká rýchlosť: jednoduchá obsluha a dá sa dokončiť do 30 minút.
■ Bezpečnosť: nevyžaduje sa žiadne organické činidlo.
■ Vysoká kvalita: Purifikované fragmenty RNA majú vysokú čistotu, neobsahujú proteín a iné nečistoty a môžu spĺňať rôzne následné experimentálne aplikácie.
Parametre produktu
■ Následné aplikácie: syntéza prvého vlákna cDNA, RT-PCR, molekulárne klonovanie, Northern Blot atď.
■ Vzorka: Čerstvé alebo mrazené rastlinné pletivá polysacharidov a polyfenolov
■ Dávkovanie: 50 mg rastlinného tkaniva
■ Maximálna väzbová kapacita RNA purifikačnej kolóny: 80 μg
■ Elučný objem: 50-200 μl
Aplikácia súpravy
Je vhodný na extrakciu a purifikáciu celkovej RNA z čerstvých alebo mrazených vzoriek rastlinného tkaniva (najmä čerstvého tkaniva listov rastlín) s vysokým obsahom polysacharidov a polyfenolov.
Pracovný tok
Diagram
Plant Total RNA Isolation Kit Plus spracovala 50 mg čerstvých listov polysacharidov a polyfenolov a 5 % purifikovanej RNA sa testovalo elektroforézou.
1: Banán
2: Ginko
3: Bavlna
4: Granátové jablko
Skladovanie a trvanlivosť
Táto súprava môže byť skladovaná 24 mesiacov v suchom prostredí pri izbovej teplote (15-25 °C);ak je potrebné skladovať dlhší čas, možno ho skladovať pri teplote 2–8 °C.
Pufer PSL1 môže byť umiestnený pri 4 °C na 1 mesiac po pridaní β-merkaptoetanolu (odporúča sa pridať ho v rovnakom čase experimentu).
Stĺpec sa upchal
Po upchatí kolóny je výťažok RNA znížený alebo dokonca nemožné purifikovať RNA a získaná hmotnosť RNA je nízka.
Analýza bežných príčin:
1. Prestávky na vzorky nie sú dôkladné.
Rozbitie vzorky nespôsobí úplné zablokovanie ČISTIACEHO STĹPCA DNA, pričom ovplyvní výťažok a kvalitu RNA.Odporúčame rýchle mletie v dostatočnom množstve tekutého dusíka, keď vzorky rozbijete. Skúste rozdrviť bunkovú stenu vzorky, bunkovú membránu a iné tkanivo.Pre rastlinné vzorky polyolových polysacharidov odporúčame použiť Plant Total RNA ISOLATION KIT PLUS.
2. Pri odsatí separovaného supernatantu vzorky pomocou kolóny na čistenie DNA sa môže inhalovať možná zrazenina fragmentovaná bunkami.
Odobraté sedimenty fragmentované bunkami spôsobia, že stĺpec LEN RNA bude zablokovaný, keď sa vykoná operácia adsorpcie RNA (pozri krok 6).Pri odsávaní tohto supernatantu odporúčame postupovať opatrne, aby nedošlo k nasatiu zvyškov buniek.
3. Počiatočné množstvo vzorky je príliš veľké.
Nadmerné používanie vzorky bude mať za následok neúplnú fragmentáciu vzorky alebo neúplnú lýzu buniek pufrom PSL1, čo vedie k zablokovaniu purifikačnej kolóny počas purifikácie.Plant Total RNA Isolation Kit Každá jedna purifikovaná pracovná vzorka má 50 mg.Pre rastlinné vzorky polyolových polysacharidov odporúčame vyskúšať Plant Total RNA ISOLATION KIT PLUS.
4. Teplota odstredivky je príliš nízka.
Celý proces izolácie a purifikácie RNA sa uskutočňuje pri teplote miestnosti (20-25°C), okrem toho, že tkanivo vzorky sa rozbije tekutým dusíkom. Teplota niektorých kryogénnych centrifúg je nižšia ako 20℃, čo môže spôsobiť zablokovanie stĺpca na čistenie DNA a/alebo stĺpca Iba RNA.Ak k tomu dôjde, nastavte teplotu odstredivky na 20-25℃, auistite sa, že lyzačná zmes a/alebo supernatant s pridaným etanolom boli predhriate na 37 °C°C.
Žiadna extrahovaná RNA alebo výťažok RNA je nízky
Zvyčajne existuje veľa faktorov, ktoré ovplyvňujú účinnosť regenerácie, ako napríklad: obsah vzorky RNA, prevádzková metóda, elučný objem atď.
Analýza bežných príčin, ako je uvedené nižšie:
1. Počas operácie sa uskutočnil ľadový kúpeľ alebo centrifugácia pri nízkej teplote (4 °C).
Odporúčanie: Pracujte pri izbovej teplote (15-25°C) v celom procese nerobte ľadový kúpeľ a nízkoteplotné odstreďovanie.
2. RNA bola degradovaná v dôsledku nesprávneho uchovávania vzorky alebo dlhodobého uchovávania vzorky.
Odporúčanie: Čerstvo odobraté vzorky by sa mali rýchlo zmraziť v tekutom dusíku a potom dlhodobo skladovať pri teplote -80 °C, vyhýbať sa opakovanému zmrazovaniu a rozmrazovaniu vzoriek;alebo vzorky ihneď namočte do roztoku stabilizátora RNA RNAlater (vzorky zvierat).
3. Nedostatočná fragmentácia vzorky a lýza vedú k zablokovaniu purifikačnej kolóny.
Návrh: Pri mletí tkaniva sa uistite, že je tkanivo dostatočne rozomleté a rýchlo ho preneste do vopred pripraveného pufra PSL1 (uistite sa, že bol pridaný správny pomer β-ME, pozri krok 1 postupu).
4. Eluent bol pridaný nesprávne.
Návrh: Uistite sa, že ddH2O bez RNázy nakvapkáte do stredu membrány čistiacej kolóny.
5. Do tlmivého roztoku PSL2 alebo tlmivého roztoku PRW2 nebol pridaný správny objem absolútneho etanolu.
Návrh: Postupujte podľa pokynov, pridajte správny objem absolútneho etanolu do pufra PSL2 a pufra PRW2 a pred použitím súpravy dobre premiešajte.
6. Množstvo vzorky tkaniva je nevhodné.
Odporúčanie: Použite 50 mg tkaniva na 500 μl pufra PSL1.Použitie príliš veľkého množstva tkaniva zníži množstvo extrahovanej RNA a zníži sa aj čistota výslednej RNA.Dôrazne odporúčame, aby počiatočná dávka vzorky nepresiahla 50 mg na operáciu extrakcie RNA.
7.Neprimeraný elučný objem alebo neúplná elúcia.
Návrh: Objem eluentu čistiacej kolóny je 50-200 μl;ak elučný efekt nie je uspokojivý, odporúča sa predĺžiť čas pri izbovej teplote po pridaní predhriatej ddH2O bez RNázy, napríklad 5-10 minút.
8. Čistiaci stĺpec obsahuje etanolový zvyšok po premytí pufrom PRW2.
Návrh: Ak sa prázdna skúmavka odstreďuje 1 minútu a po premytí v pufri PRW2 stále zostáva etanol, môžete predĺžiť čas odstreďovania prázdnej skúmavky na 2 minúty alebo umiestniť čistiacu kolónu pri izbovej teplote na 5 minút, aby sa úplne odstránil zvyškový etanol.
9. Súprava bola použitá nesprávne.
Návrh: V prípade rastlinných vzoriek polyfenolických polysacharidov, použitie bežných súprav, ako je Plant Total RNA Isolation Kit, nemusí byť schopné získať ideálne vzorky RNA.Odporúčame vám použiť Plant Total RNA IsolationKit Plus, ktorý je špeciálne navrhnutý pre vzorky rastlín s polyfenolickými polysacharidmi.Súprava špeciálne vyvinutá na extrakciu RNA z polyfenolových a polysacharidových vzoriek rastlín.
Hodnota OD260/OD280 je nízka
Elúcia RNA pomocou ddH20 a použitá na odčítanie spektrofotometrom vedie k nízkym hodnotám OD260/OD280.Na získanie relatívne správnych hodnôt OD260/OD280 odporúčame použiť 10 mM Tris-HCl, pH 7,5 (namiesto ddH2O bez RNázy), pozri „Testy koncentrácie a purifikácie RNA“ na strane 19.
Purifikovaná RNA je degradovaná
Kvalita purifikovanej RNA súvisí s faktormi, ako je konzervácia vzorky, kontaminácia RNázou a manipulácia.
Analýza bežných príčin:
1. Vzorky tkaniva neboli po odbere včas uložené.
Odporúčanie: Ak sa vzorky tkaniva nepoužijú včas po odbere, ihneď ich uložte do tekutého dusíka pri nízkej teplote alebo ich po rýchlom zmrazení v tekutom dusíku preneste na -80°C na dlhodobé skladovanie, alebo vzorky ihneď ponorte do roztoku stabilizátora RNA RNAlater (vzorky zvierat).Na extrakciu RNA skúste použiť čerstvo odobraté vzorky tkaniva.
2.Opakované zmrazovanie a rozmrazovanie vzoriek tkaniva.
Odporúčanie: Pri skladovaní vzoriek tkaniva je najlepšie ich rozrezať na malé kúsky kvôli konzervácii a časť z nich pri použití vybrať, aby sa zabránilo degradácii RNA spôsobenej opakovaným zmrazovaním a rozmrazovaním vzoriek.
3.RNáza je zavedená na operačnej sále alebo nenosené jednorazové rukavice, masky atď.
Návrh: Experimenty s extrakciou RNA sa najlepšie vykonávajú v samostatných operáciách RNA a laboratórny stôl by sa mal pred experimentom vyčistiť a počas experimentu by sa mali používať jednorazové rukavice a masky, aby sa v čo najväčšej miere zabránilo degradácii RNA spôsobenej zavedením RNázy.
4. Činidlo je počas používania kontaminované RNázou.
Návrh: Vymeňte za novú sériu súprav na extrakciu celkovej rastlinnej RNA pre súvisiace experimenty.
5. Centrifugačné skúmavky a špičky pipiet používané na manipuláciu s RNA sú kontaminované RNázou.
Návrh: Uistite sa, že všetky centrifugačné skúmavky, špičky pipiet, pipety atď. používané pri extrakcii RNA neobsahujú RNázu.
Návody na použitie:
Návod na použitie súpravy Plant Total RNA Isolation Kit Plus
