Súprava na izoláciu rastlinnej celkovej RNA Súprava na čistenie celkovej RNA pre rastliny s nízkym obsahom polysacharidov a polyfenolov
technické údaje
50 príprav, 200 príprav
Súprava využíva spinovú kolónu a receptúru vyvinutú spoločnosťou Foregene, ktorá dokáže efektívne extrahovať vysoko čistú a kvalitnú celkovú RNA z rôznych rastlinných tkanív s nízkym obsahom polysacharidov a polyfenolov.Pre vzorky rastlín s vysokým obsahom polysacharidov alebo polyfenolov sa odporúča použiť súpravu Plant Total RNA Isolation Plus Kit, aby ste dosiahli lepšie výsledky extrakcie RNA.Súprava obsahuje kolónu na čistenie DNA, ktorá dokáže jednoducho odstrániť genómovú DNA zo supernatantu a tkanivového lyzátu.Kolóna obsahujúca iba RNA môže účinne viazať RNA.Súprava dokáže spracovať veľké množstvo vzoriek súčasne.
Celý systém neobsahuje RNázu, takže purifikovaná RNA nebude degradovaná.Pufer PRW1 a Pufer PRW2 môžu zabezpečiť, že získaná RNA nie je kontaminovaná proteínom, DNA, iónmi a organickými zlúčeninami.
Komponenty súpravy
| Buffer PSL1, Buffer PS, Buffer PSL2 |
| Pufer PRW1, Pufer PRW2 |
| ddH bez RNázy2O, stĺpec na čistenie DNA |
| RNA-Len stĺpec |
| Inštrukcie |
Vlastnosti a výhody
■ Prevádzka pri izbovej teplote (15-25 °C) počas celého procesu, bez ľadového kúpeľa a nízkoteplotného odstreďovania.
■ Kompletná súprava bez RNázy, nemusíte sa obávať degradácie RNA.
■ DNA-Cleaning Column sa špecificky viaže na DNA, takže súprava môže odstrániť kontamináciu genómovou DNA bez pridania DNázy.
■ Vysoký výťažok RNA: RNA-only Stĺpec a jedinečný vzorec môžu účinne čistiť RNA.
■ Vysoká rýchlosť: jednoduchá obsluha a dá sa dokončiť do 30 minút.
■ Bezpečnosť: nevyžaduje sa žiadne organické činidlo.
■ Vysoká kvalita: Purifikované fragmenty RNA majú vysokú čistotu, neobsahujú proteín a iné nečistoty a môžu spĺňať rôzne následné experimentálne aplikácie.
Aplikácia súpravy
Je vhodný na extrakciu a purifikáciu celkovej RNA z čerstvých alebo mrazených vzoriek rastlinného tkaniva (najmä čerstvého tkaniva listov rastlín) s nízkym obsahom polysacharidov a polyfenolov.
Pracovný tok
Diagram
Plant Total RNA Isolation Kit Plus spracovala 50 mg čerstvých listov polysacharidov a polyfenolov a 5 % purifikovanej RNA sa testovalo elektroforézou.
1: Banán
2: Ginko
3: Bavlna
4: Granátové jablko
Skladovanie a trvanlivosť
Súpravu možno skladovať 12 mesiacov pri izbovej teplote (15–25 ℃) v suchom prostredí a 2–8 ℃ dlhšie (24 mesiacov).
Po pridaní 2-hydroxy-1-etántiolu (voliteľné) je možné tlmivý roztok PSL1 skladovať pri 4 °C počas 1 mesiaca.
Sprievodca analýzou problémov
Nasledujúca analýza problémov, s ktorými sa môžete stretnúťCelkový počet rastlínRNA extraction will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.
Rotačný stĺpec je upchatý
Blokovanie rotačnej kolóny spôsobí, že výťažok RNA bude znížený alebo dokonca nebude možné ho vyčistiť, aby sa získala RNA, a kvalita získanej RNA bude nízka.
Analýza bežných príčin:
1. Vzorka nie je úplne rozbitá.
Neúplná fragmentácia vzorky môže zablokovať kolónu na čistenie DNA, čo môže tiež ovplyvniť výťažok a kvalitu RNA.Pri vykonávaní fragmentácie vzorky odporúčame rýchlo rozdrviť v dostatočnom množstve tekutého dusíka, aby sa čo najviac rozbili tkanivá, ako sú bunkové steny a bunkové membrány vzoriek.Pre rastlinné vzorky polyfenolových polysacharidov odporúčame použiť Plant Total RNA Isolation Kit Plus.
2. Nasajte izolovaný supernatant z kolóny na čistenie DNA, odsajte možné pelety bunkového odpadu.
Nasaté pelety bunkového odpadu môžu upchať kolónu obsahujúcu iba RNA počas adsorpcie RNA (pozri krok 5 postupu, krok 6 postupu polysacharid polyfenol).Odporúčame, aby ste pri nasávaní tohto supernatantu boli opatrní, aby nedošlo k nasatiu zvyškov buniek.
3. Počiatočné množstvo vzorky je príliš veľké.
Nadmerné používanie vzorky bude mať za následok neúplnú fragmentáciu vzorky alebo neúplnú lýzu buniek pufrom PRL1 alebo pufrom PSL1, čo vedie k upchatiu purifikačnej kolóny pri purifikačných operáciách.Plant Total RNA Isolation Kit má počiatočné maximum 50 mg na jedno čistenie operovanej vzorky.Pre rastlinné vzorky polyfenolových polysacharidov odporúčame vyskúšať súpravu Plant Total RNA Isolation Kit Plus.
4. Teplota odstredivky je príliš nízka.
Izolácia a purifikácia celej RNA okrem rozrušenia vzorky tkaniva tekutým dusíkom, všetky kroky sa uskutočňujú pri teplote miestnosti (20-25 °C).Niektoré nízkoteplotné centrifúgy majú teploty nižšie ako 20 °C, čo môže spôsobiť zablokovanie kolóny na čistenie DNA a/alebo kolóny len s RNA.Ak k tomu dôjde, nastavte teplotu centrifúgy na 20 – 25 °C a predhrejte lyzovanú zmes a/alebo pridaný etanolový separačný supernatant na 37 °C.
Žiadna extrahovaná RNA alebo výťažok RNA je nízky
Zvyčajne existuje veľa faktorov, ktoré ovplyvňujú účinnosť regenerácie, ako napríklad: obsah vzorky RNA, prevádzková metóda, elučný objem atď.
Analýza bežných príčin, ako je uvedené nižšie:
1. Počas operácie sa uskutočnil ľadový kúpeľ alebo centrifugácia pri nízkej teplote (4 °C).
Odporúčanie: Počas celého procesu pracujte pri izbovej teplote (15-25°C), nevykonávajte ľadový kúpeľ a nízkoteplotné odstreďovanie.
2.RNA bola degradovaná v dôsledku nesprávneho uchovávania vzorky alebo dlhodobého uchovávania vzorky.
Odporúčanie: Čerstvo odobraté vzorky by sa mali rýchlo zmraziť v tekutom dusíku a potom dlhodobo skladovať pri teplote -80 °C, vyhýbať sa opakovanému zmrazovaniu a rozmrazovaniu vzoriek;alebo vzorky ihneď namočte do roztoku stabilizátora RNA RNAlater (vzorky zvierat).
3.Nedostatočná fragmentácia vzorky a lýza vedú k zablokovaniu purifikačnej kolóny.
Návrh: Pri mletí tkaniva sa uistite, že je tkanivo dostatočne rozomleté a rýchlo ho preneste do vopred pripraveného pufra PSL1 (uistite sa, že bol pridaný správny pomer β-ME, pozri krok 1 postupu).
4. Eluent bol pridaný nesprávne.
Návrh: Uistite sa, že ddH bez RNázy2O sa kvapká do stredu membrány čistiacej kolóny.
5. Do tlmivého roztoku PSL2 alebo tlmivého roztoku PRW2 nebol pridaný správny objem absolútneho etanolu.
Návrh: Postupujte podľa pokynov, pridajte správny objem absolútneho etanolu do pufra PSL2 a pufra PRW2 a pred použitím súpravy dobre premiešajte.
6. Množstvo vzorky tkaniva je nevhodné.
Odporúčanie: Použite 50 mg tkaniva na 500 μl pufra PSL1.Použitie príliš veľkého množstva tkaniva zníži množstvo extrahovanej RNA a zníži sa aj čistota výslednej RNA.Dôrazne odporúčame, aby počiatočná dávka vzorky nepresiahla 50 mg na operáciu extrakcie RNA.
7. Neprimeraný elučný objem alebo neúplná elúcia.
Návrh: Objem eluentu čistiacej kolóny je 50-200 μl;ak elučný efekt nie je uspokojivý, odporúča sa predĺžiť čas pri izbovej teplote po pridaní predhriateho ddH bez RNázy2O, napríklad 5-10 min.
8. Čistiaci stĺpec obsahuje etanolový zvyšok po premytí pufrom PRW2.
Návrh: Ak sa prázdna skúmavka odstreďuje 1 minútu a po premytí v pufri PRW2 stále zostáva etanol, môžete predĺžiť čas odstreďovania prázdnej skúmavky na 2 minúty alebo umiestniť čistiacu kolónu pri izbovej teplote na 5 minút, aby sa úplne odstránil zvyškový etanol.
9. Súprava bola použitá nesprávne.
Návrh: V prípade rastlinných vzoriek polyfenolických polysacharidov, použitie bežných súprav, ako je Plant Total RNA Isolation Kit, nemusí byť schopné získať ideálne vzorky RNA.Odporúčame vám použiť Plant Total RNA IsolationKit Plus, ktorý je špeciálne navrhnutý pre vzorky rastlín s polyfenolickými polysacharidmi.Súprava špeciálne vyvinutá na extrakciu RNA z polyfenolových a polysacharidových vzoriek rastlín.
Hodnota OD260/OD280 je nízka
Elúcia RNA s ddH2O a použité na odčítanie spektrofotometrom majú za následok nízke hodnoty OD260/OD280.Odporúčame použiť 10 mM Tris-HCl, pH 7,5 (namiesto ddH bez RNázy2O na elúciu RNA), aby ste získali relatívne správne hodnoty OD260/OD280, pozrite si časť „Testy koncentrácie a purifikácie RNA“ na strane 19.
Purifikovaná RNA je degradovaná
Kvalita purifikovanej RNA súvisí s faktormi, ako je konzervácia vzorky, kontaminácia RNázou a manipulácia.
Analýza bežných príčin:
1. Vzorky tkaniva neboli po odbere včas uložené.
Odporúčanie: Ak sa vzorky tkaniva nepoužijú včas po odbere, ihneď ich uložte do tekutého dusíka pri nízkej teplote alebo ich po rýchlom zmrazení v tekutom dusíku preneste na -80°C na dlhodobé skladovanie, alebo vzorky ihneď ponorte do roztoku stabilizátora RNA RNAlater (vzorky zvierat).Na extrakciu RNA skúste použiť čerstvo odobraté vzorky tkaniva.
2.Opakované zmrazovanie a rozmrazovanie vzoriek tkaniva.
Odporúčanie: Pri skladovaní vzoriek tkaniva je najlepšie ich rozrezať na malé kúsky kvôli konzervácii a časť z nich pri použití vybrať, aby sa zabránilo degradácii RNA spôsobenej opakovaným zmrazovaním a rozmrazovaním vzoriek.
3.RNáza je zavedená na operačnej sále alebo nenosené jednorazové rukavice, masky atď.
Návrh: Experimenty s extrakciou RNA sa najlepšie vykonávajú v samostatných operáciách RNA a laboratórny stôl by sa mal pred experimentom vyčistiť a počas experimentu by sa mali používať jednorazové rukavice a masky, aby sa v čo najväčšej miere zabránilo degradácii RNA spôsobenej zavedením RNázy.
4. Činidlo je počas používania kontaminované RNázou.
Návrh: Vymeňte za novú sériu súprav na extrakciu celkovej rastlinnej RNA pre súvisiace experimenty.
5. Centrifugačné skúmavky a špičky pipiet používané na manipuláciu s RNA sú kontaminované RNázou.
Návrh: Uistite sa, že všetky centrifugačné skúmavky, špičky pipiet, pipety atď. používané pri extrakcii RNA neobsahujú RNázu.
Návody na použitie:
