Súprava Cell Direct RT qPCR—Taqman Direct Cell Lysis Cell Ready Jednokrokové súpravy qRT-PCR Sonda
Popisy
Tento produkt využíva jedinečný systém lýzového pufra na rýchle uvoľnenie RNA zo vzoriek kultivovaných buniek pre reakcie RT-qPCR, čím sa eliminuje časovo náročný a namáhavý proces purifikácie RNA a iba 7 minút na získanie požadovaného RNA templátu, s 5× Direct RT Mix, 2× Direct qPCR Mix-Taqman poskytovaným súpravou môže rýchlo a efektívne získať kvantitatívne výsledky PCR v reálnom čase.
5× Direct RT Mix a 2× Direct qPCR Mix-Taqman majú silnú toleranciu voči inhibítorom a môžu vykonávať účinnú reverziu a špecifickú amplifikáciu pomocou lyzátu vzorky, ktorá sa má merať ako šablóny.Činidlo obsahuje Foregene reverznú transkriptázu, Hot D-Taq DNA polymerázu, dNTPs, MgCl2, reakčný pufer, PCR Optimizer a stabilizátor, ktorý možno použiť s lyzačným pufrom na rýchlu a jednoduchú detekciu vzoriek a má vlastnosti vysokej citlivosti, špecifickosti a stability.
technické údaje
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
Komponenty súpravy
| QuickEasyTMSúprava Cell Direct RT-qPCR-Taqman | ||||
| Komponenty súpravy 20 μl qPCR reakčný systém | DRT-01021 | DRT-01022 | Poznámka | |
| 200 T | 1000 T | |||
|
Časť I | Pufr CL | 4 ml | 20 ml | Bunková lýza |
| Foregene Protease Plus II | 80 μl | 400 μl | ||
| Buffer ST | 400 μl | 1 ml × 2 | ||
|
Časť II | DNA Eraser | 80 μl | 400 μl | |
| 5 × Direct RT Mix * | 160 μl | 800 μl | RT | |
| 2× Direct qPCR Mix-Taqman * | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 | qPCR | |
| 20x referenčné farbivo ROX | 40 μl | 200 μl | ||
| ddH bez RNázy2O | 1,7 ml | 10 ml | ||
| Návod na použitie | 1 kus | 1 kus | ||
*:Cell Lysis, 5×Direct RT Mix, 2× Direct qPCR Mix-Taqman je možné zakúpiť samostatne
Vlastnosti a výhody
■Jednoduché a efektívne: s technológiou Cell Direct RT je možné získať vzorky RNA len za 7 minút.
■ Požiadavka na vzorku je malá, možno otestovať len 10 buniek.
■ Vysoká priepustnosť: dokáže rýchlo detegovať RNA v bunkách kultivovaných v 384, 96, 24, 12, 6-jamkových platniach.
■ DNA Eraser môže rýchlo odstrániť uvoľnené genómy a výrazne znížiť vplyv na následné výsledky experimentov.
■ Optimalizovaný systém RT a qPCR robí dvojkrokovú reverznú transkripciu RT-PCR efektívnejšou a PCR špecifickejšou a odolnejšou voči inhibítorom reakcie RT-qPCR.
Aplikácia súpravy
Rozsah použitia: kultivované bunky.
- RNA uvoľnená lýzou vzorky: použiteľné len pre RT-qPCR templát tejto súpravy.
- Súpravu je možné použiť na nasledujúce účely: analýza génovej expresie, overenie efektu umlčania génov sprostredkovaného siRNA, skríning liekov atď.
Skladovanie a trvanlivosť
Časť I tejto súpravy by sa mala skladovať pri 4℃;Časť II by sa mala skladovať pri teplote -20 °C.
Foregene Protease Plus II sa má uchovávať pri 4℃, nezmrazovať pri -20 ℃.
Činidlo 2×Direct qPCR Mix-Taqman by sa mal skladovať pri -20℃v tme;pri častom používaní sa dá uložiť aj na 4℃ na krátkodobé skladovanie (spotrebujte do 10 dní).
Princípy návrhu primérov PCR v reálnom čase
Forward Primer a Reverse Primer
Pre Real Time PCR je veľmi dôležitý návrh priméru.Priméry súvisia so špecifickosťou a účinnosťou amplifikácie PCR a môžu byť navrhnuté s odkazom na nasledujúce princípy:
- Dĺžka priméru: 18-30 bp.
- Obsah GC: 40-60 %.
- Hodnota Tm: Softvér na návrh základného náteru, ako napríklad Primer 5, môže poskytnúť hodnotu Tm základného náteru.Hodnoty Tm upstream a downstream primérov by mali byť čo najbližšie.Môže sa použiť aj vzorec na výpočet Tm: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Pri vykonávaní PCR sa ako teplota nasadenia vo všeobecnosti vyberie teplota pod hodnotou Tm priméru 5 °C (zodpovedajúce zvýšenie teploty nasadenia môže zvýšiť špecifickosť reakcie PCR).
- Priméry a produkty PCR:
- Dĺžka produktu amplifikácie PCR priméru je výhodne 100 až 150 bp.
- Navrhovaným základným náterom v sekundárnej štruktúrnej oblasti šablóny by ste sa mali čo najviac vyhnúť.
- Vyhnite sa tvorbe 2 alebo viacerých komplementárnych báz medzi 3' koncami upstream a downstream primérov.
- Primer 3′ terminálová základňa nemôže byť prítomná s 3 dodatočnými po sebe idúcimi G alebo C.
- Priméry samotné nemôžu mať komplementárne štruktúry, inak sa vytvorí vlásenková štruktúra, ktorá ovplyvňuje PCR amplifikáciu.
- ATCG by sa malo distribuovať čo najrovnomernejšie v sekvencii primérov a 3 'terminálna báza by sa mala vyhnúť ako T.
Dodatok1: Cell DirectRT-qPCR Komponent súpravyt doplnkové balenie
1. Roztok na lýzu buniek
| Roztok na bunkovú lýzu | |||
| Komponenty súpravy (24-jamkový lýzový systém / jamka) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| Časťja | Pufr CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Buffer ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| ČasťII | DNA Eraser | 400 μl | 1 ml × 2 |
| RT zmes | |
| Komponenty súpravy (20 μl reakčného systému) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5× Direct RT Mix | 800 μl |
| ddH bez RNázy2O | 1,7 ml × 2 |
| qPCR mix | ||
| Komponenty súpravy (20 μl reakčného systému) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Direct qPCR Mix-Taqman | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 20× referenčné farbivo ROX | 40 μl | 200 μl |
| ddH bez RNázy2O | 1,7 ml | 10 ml |
Návody na použitie:
