(96-jamková) súprava QuickEasy Cell Direct RT-qPCR – SYBR Green I
Popisy
The(96-jamkové) QuickEasyTM Súprava Cell Direct RT-qPCR–SYBR Zelená Iposkytujejedinečný systém lyzačného pufrato rýchlo uvoľniť RNAz kultivovanej bunkyvzorky pre reakcie RT-qPCR, čím sa eliminujú časovo náročné a pracnéProces čistenia RNA a získanie požadovaného templátu RNA trvá iba 7 minút.The5× Direct RT Mixa2× Direct qPCR Mix-SYBRdodávané v krabici môže rýchlo aefektívne získavať kvantitatívne údaje v reálnom časevýsledky PCR.
5× Direct RT Mix a 2× Direct qPCR Mix-SYBR majú silnú toleranciu inhibítorov a môžu použiť lyzát vzorky, ktorá sa má testovať, ako templát pre účinnú reverznú transkripciu a špecifickú amplifikáciu.Činidlo obsahuje Foregene unikátnu reverznú transkriptázu s vysokou afinitou k RNA, ako aj Hot D-Taq DNA polymerázu, dNTPs, MgCl2 , reakčný pufor, PCR optimalizátor a stabilizátor a možno ho použiť v spojení s lyzačným pufrom na rýchlu, jednoduchú a presnú detekciu vzorky a má vlastnosti vysokej citlivosti, silnej špecifickosti a dobrej stability.
Súprava je zameraná na lýzu mikrosystému 96-jamkových kultivovaných buniek a má dobrú uniformitu a konzistenciu;komponenty súpravy poskytujú 96 lýzových reakcií, 96 reverzných transkripčných reakcií a 96×2 qPCR reakcií, ktoré môžu splniť 96-jamkovú doštičku s bunkami na jednorazové použitie, čím sa zabráni znečisteniu spôsobenému opakovaným otváraním, zmrazovaním a rozmrazovaním reagencií a degradáciou výkonu reagencií.
Komponenty súpravy
| Zloženie súpravy ( 50 μL lýzový systém/20 μlRT reakčný systém /20μL qPCR reakčný systém) | DRT-03011 | Poznámka | |
| 96T | |||
| ČasťI | BufferCL | 5 ml | BunkaLysis |
| ForegeneProteáza Plus II | 100 μL | ||
| BufferST | 500 μL | ||
| Časť II | DNAGuma | 100 μL | |
| 5× Direct RT Mix | 400 μL | RT | |
| 2× Direct qPCR Mix-SYBR | 1 mL × 2 | qPCR | |
| 50× referenčné farbivo ROX | 400ul | ||
| RNáza- zadarmoddH2 O | 1,7 ml |
| |
| Mročný | 1 kus | 1 porcia | |
*: Lyzačné činidlo DNA Eraser je súčasťou II. časti súpravy;Komponenty Cell Lysis, RT a qPCR je možné zakúpiť samostatne.
Vlastnosti a výhody
■Jednoduché a efektívne: s technológiou Cell Direct RT je možné získať vzorky RNA len za 7 minút.
■ Požiadavka na vzorku je malá, možno otestovať len 10 buniek.
■ Vysoká priepustnosť: dokáže rýchlo detegovať RNA v bunkách kultivovaných v 384, 96, 24, 12, 6-jamkových platniach.
■ DNA Eraser môže rýchlo odstrániť uvoľnené genómy a výrazne znížiť vplyv na následné výsledky experimentov.
■ Optimalizovaný systém RT a qPCR robí dvojkrokovú reverznú transkripciu RT-PCR efektívnejšou a PCR špecifickejšou a odolnejšou voči inhibítorom reakcie RT-qPCR.
Aplikácia súpravy
Rozsah použitia: kultivované bunky.
- RNA uvoľnená lýzou vzorky: použiteľné len pre RT-qPCR templát tejto súpravy.
- Súpravu je možné použiť na nasledujúce účely: analýza génovej expresie, overenie efektu umlčania génov sprostredkovaného siRNA, skríning liekov atď.
Skladovanie a trvanlivosť
Časť I tejto súpravy by sa mala skladovať pri 4℃;Časť II by sa mala skladovať pri teplote -20 °C.
Foregene Protease Plus II sa má uchovávať pri 4℃, nezmrazovať pri -20 ℃.
Činidlo 2×Direct qPCR Mix-Taqman by sa mal skladovať pri -20℃v tme;pri častom používaní sa dá uložiť aj na 4℃ na krátkodobé skladovanie (spotrebujte do 10 dní).
Princípy návrhu primérov PCR v reálnom čase
Forward Primer a Reverse Primer
Pre Real Time PCR je veľmi dôležitý návrh priméru.Priméry súvisia so špecifickosťou a účinnosťou amplifikácie PCR a môžu byť navrhnuté s odkazom na nasledujúce princípy:
- Dĺžka priméru: 18-30 bp.
- Obsah GC: 40-60 %.
- Hodnota Tm: Softvér na návrh základného náteru, ako napríklad Primer 5, môže poskytnúť hodnotu Tm základného náteru.Hodnoty Tm upstream a downstream primérov by mali byť čo najbližšie.Môže sa použiť aj vzorec na výpočet Tm: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Pri vykonávaní PCR sa ako teplota nasadenia vo všeobecnosti vyberie teplota pod hodnotou Tm priméru 5 °C (zodpovedajúce zvýšenie teploty nasadenia môže zvýšiť špecifickosť reakcie PCR).
- Priméry a produkty PCR:
- Dĺžka produktu amplifikácie PCR priméru je výhodne 100 až 150 bp.
- Navrhovaným základným náterom v sekundárnej štruktúrnej oblasti šablóny by ste sa mali čo najviac vyhnúť.
- Vyhnite sa tvorbe 2 alebo viacerých komplementárnych báz medzi 3' koncami upstream a downstream primérov.
- Primer 3′ terminálová základňa nemôže byť prítomná s 3 dodatočnými po sebe idúcimi G alebo C.
- Priméry samotné nemôžu mať komplementárne štruktúry, inak sa vytvorí vlásenková štruktúra, ktorá ovplyvňuje PCR amplifikáciu.
- ATCG by sa malo distribuovať čo najrovnomernejšie v sekvencii primérov a 3 'terminálna báza by sa mala vyhnúť ako T.
Dodatok1: Cell DirectRT-qPCR Komponent súpravyt doplnkové balenie
1. Roztok na lýzu buniek
| Roztok na bunkovú lýzu | |||
| Komponenty súpravy (24-jamkový lýzový systém / jamka) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| Časťja | Pufr CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Buffer ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| ČasťII | DNA Eraser | 400 μl | 1 ml × 2 |
| RT zmes | |
| Komponenty súpravy (20 μl reakčného systému) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5× Direct RT Mix | 800 μl |
| ddH bez RNázy2O | 1,7 ml × 2 |
| qPCR mix | ||
| Komponenty súpravy (20 μl reakčného systému) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Direct qPCR Mix-Taqman | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 20× referenčné farbivo ROX | 40 μl | 200 μl |
| ddH bez RNázy2O | 1,7 ml | 10 ml |
Návody na použitie:
