Priama súprava RT-qPCR II
Popis súpravy:
◮Priama RT-qPCR súprava, využívajúca Foreasy reverznú transkriptázu a Foreasy HS Taq DNA polymerázu vyvinutú spoločnosťou Foregene, s jedinečným reakčným pufrom, robí túto súpravu so silnou rezistenciou a kompatibilitou a môže priamo testovať reakciu pomocou systému Foregene Lysis ako templátu.Táto súprava sa môže použiť na súpravu na detekciu nukleových kyselín COVID-19 a vývoj súpravy na detekciu nukleových kyselín pre iné patogénne baktérie.
Popis
Direct RT-qPCR Kit poskytuje samostatne balený RT-qPCR pufor, vysokoúčinnú Foreasy HS Taq DNA polymerázua predpovedná reverzná transkriptáza (MMLV),čo uľahčuje vytváranie back-end kitov a nastavovanie systému v rámci jednoduchého overenia.
Priama RT-qPCR súprava, využívajúca Foreasy reverznú transkriptázu a Foreasy HS Taq DNA polymerázu vyvinutú spoločnosťou Foregene, s jedinečným reakčným pufrom, robí túto súpravu so silnou rezistenciou a kompatibilitou a môže priamo testovať reakciu pomocou systému Foregene Lysis ako templátu.Táto súprava sa môže použiť na súpravu na detekciu nukleových kyselín COVID-19 a vývoj súpravy na detekciu nukleových kyselín pre iné patogénne baktérie.
Táto súprava môže byť priamo súčasťou produktu IVD, a to jednoducho a rýchlo.Potrebuje len ľahké overenie bez opätovného vývoja.
technické údaje
500 T, 50 000 T
Komponenty súpravy
| Obsah súpravy (20 μl reakčný systém) | IM-05111-02 | IM-05112-02 |
| 500 T | 50 000 T | |
| Predvídavý Rinverzná transkriptáza (200 U/μL) | 50 ul×1 | 1 ml×5 |
| Foreasy HS Taq DNA polymeráza (5 U/μL) | 100 ul×1 | 1 ml×10 |
| 2× Direct RT-qPCRBuffer | 1 ml × 5 | 500 ml × 1 |
| Inštrukcia | 1 | 1 |
Prevádzkové kroky
A: Pripravte si šablónu a činidlo
1. Pripravte si pripravenú RNA templát (odporúča sa použiť súpravu Foregene Total RNA Isolation Kit na extrakciu a purifikáciu RNA templátu) alebo produkt na krakovanie vzorky (odporúča sa použiť Foregene Lysis systém), špecifické priméry (10 μM) a ďalší relevantný spotrebný materiál, prístroj.
2. Vložte 2× tlmivý roztok Direct RT-qPCR, ddH2O bez RNázy a 20× referenčné farbivo ROX (ak je to potrebné) do krabice s ľadom, aby sa prirodzene roztopili, a jemne premiešajte.
B: Príprava systému RT-qPCR
Získajte polovičný objem reakčného pufra reakčného systému (napríklad, ak je objem systému 20 μl, je potrebné získať 10 μl 2× Direct RT-qPCR Buffer). Prezodpovedajúce množstvo enzýmu, to navrhujemeM-MLV: 10-30 U/20 μL reakčný systém,TaqDNA polymeráza：1-2 U/20 μL reakčný systémtoto je náš návrh, mali by ste ho otestovať a upraviť), pridajte RNA templát, špecifické priméry a sondy a pridajte ddH bez RNázy2O až 20 μl.Špecifickú prípravu reakčného systému RT-qPCR možno uviesť v nasledujúcej tabuľke 1.
Tabuľka 1: Príprava systému RT-qPCR
| Komponent | Objem | Záverečné sústredenie |
| 2× Direct RT-qPCR Buffer | 10 μl | 1× |
| Predpovedná reverzná transkriptáza (MMLV) | 10-30 U | |
| Foreasy HS Taq DNA polymeráza | 1-2 U | |
| Forward Primer (10 μM) | 0,8 μl | 50-900 nM |
| Reverzný základný náter (10 μM) | 0,8 μl | 50-900 nM |
| Sonda (4 μM) | 1 μl | 200 nM |
| Šablóna (RNA alebo lyzát) | X ul | |
| 20× referenčné farbivo ROX | - | 1* |
| RNase-FreeddH2O | (6,4-X) ul | |
| Celkový objem | 20 ul |
Poznámka: Forward Primer a Reverse Primer sú špecifické priméry cieľového génu.Systém qPCR je možné upraviť podľa praktických experimentálnych a PCR modelov.Pre konečnú koncentráciu väčšiny primerov odporúčame 400 nM.Upravte objem konkrétnych primerov a sond podľa pripravenej koncentrácie a odporúčanej konečnej koncentrácie.
1*: Vyberte vhodnú konečnú koncentráciu referenčného farbiva ROX podľa rôznych kvantitatívnych nástrojov PCR.Optimálna koncentrácia referenčného farbiva ROX v bežných kvantitatívnych PCR prístrojoch je uvedená v nasledujúcej tabuľke:
| Kvantitatívne nástroje PCR | Konečná koncentrácia referenčného farbiva ROX |
| ABI PRISM 7000/7300/7700/7900HT/Prvý krok,atď. | 1× (napríklad pridajte 1 μl 20 × ROX referenčného farbiva do 20 μl reakčného systému) |
| ABI 7500, 7500 Fast, Stratagene Mx3000P, Mx3005P a Mx4000 atď. | 0,5× (napríklad pridajte 0,5 μl 20× ROX referenčného farbiva do 20 μl reakčného systému) |
| Roche PCR prístroj, Bio-Rad PCR prístroj, Eppendorf kvantitatívny PCR prístroj atď. | Bez referenčného farbiva ROX |
Skladovanie a trvanlivosť
Súprava by sa mala skladovať pri teplote -20 ± 5 °C.Okamžite ho skladujte v termostatickej chladničke pri teplote -20 °C.Doba platnosti je 2 roky, ak je skladovaný vo vhodnom stave.
