Sprievodca analýzou problémov

The following is an analysis of the problems that may be encountered in the extraction of plant genomic DNA, hoping to be helpful to your experiments. In addition, for other experimental or technical problems other than operation instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us: 028-83360257 or E-mali: Tech@foregene.com.

Nízky výťažok alebo žiadna DNA

Zvyčajne existuje veľa faktorov, ktoré ovplyvňujú výťažok genómovej DNA, vrátane zdroja vzorky, veku vzorky, podmienok skladovania vzorky a operácie.

Počas extrakcie nebolo možné získať genómovú DNA

1. Vzorky tkaniva sú nesprávne skladované alebo skladované príliš dlho, čo vedie k degradácii genómovej DNA.

Odporúčanie: Vzorky tkaniva skladujte v tekutom dusíku alebo -20°C;skúste použiť novo odobraté vzorky na extrakciu genómovej DNA.

2. Príliš malé množstvo vzorky môže spôsobiť, že príslušná genómová DNA nebude extrahovaná.

Návrh: V prípade vzoriek tkaniva, ktoré boli dlho skladované alebo majú ťažkú ​​degradáciu genómovej DNA, je možné vhodne zvýšiť množstvo vzoriek tkaniva, aby sa extrahovalo značné množstvo genómovej DNA.Množstvo vzorky možno určiť podľa potrieb DNA, ale čerstvá vzorka by nemala presiahnuť 100 mg a suchá vzorka by nemala presiahnuť 30 mg.

3. Vzorka nie je rozomletá tekutým dusíkom alebo umiestnená príliš dlho po tekutom dusíku.

Návrh: Počas extrakcie DNA je potrebné vzorku úplne rozdrviť tekutým dusíkom, aby sa porušila bunková stena;po rozomletí preneste vzorku prášku do PL1 predhriatej na 65°C čo najskôr (akonáhle sa rozomletý prášok roztopí, genómová DNA začne rýchlo degradovať) .

4. Nesprávne skladovanie Foregene Protease má za následok zníženú alebo inaktivovanú aktivitu.

Odporúčanie: Potvrďte podmienky skladovania Foregene Protease alebo ju nahraďte novou Foregene Proteázou na enzymatickú hydrolýzu.

5. Súprava je nesprávne skladovaná alebo skladovaná príliš dlho, čo spôsobuje zlyhanie niektorých komponentov súpravy.

Odporúčanie: Kúpte si novú súpravu na extrakciu genómovej DNA rastlín pre súvisiace operácie.

6. Nesprávne použitie súpravy.

Návrh: Kúpte si súpravu na izoláciu rastlinnej DNA určenú na vzorky na extrakciu a purifikáciu rastlinnej genómovej DNA.

7. Buffer WB bez pridania abezvodý etanol.

Odporúčanie: Uistite sa, že ste do pufra WB pridali správny objem absolútneho etanolu.

8. Eluent nebol správne nakvapkaný na silikagélovú membránu.

Návrh: Pridajte predhriaty eluent na 65℃po kvapkách do stredu silikagélovej membrány a nechajte pri izbovej teplote 5 minút, aby sa zvýšila elučná účinnosť.

Extrakcia na získanie genómovej DNA s nízkym výťažkom

1. Vzorka je nesprávne skladovaná alebo skladovaná príliš dlho, čo vedie k degradácii genómovej DNA.

Odporúčanie: Vzorky tkaniva skladujte pri -20℃;skúste použiť novo odobraté vzorky tkaniva na extrakciu genómovej DNA.

2. Ak je množstvo vzoriek tkaniva príliš malé, extrahovaná genómová DNA bude menšia.

Návrh: Niektoré vzorky rastlín sú bohaté na vodu, napr. vodné rastliny ako riasy a pod., dávkovanie je možné vhodne zvýšiť alebo vodu pred operáciou trochu vysušiť.

3. Vzorky neboli dôkladne rozomleté ​​kvapalným dusíkom alebo boli po rozomletí ponechané príliš dlho pri izbovej teplote.

Návrh: Mletie kvapalným dusíkom musí byť dostatočné a bunková stena vzorky by mala byť čo najviac rozbitá;ihneď po rozomletí by sa mala vzorka prášku preniesť do 65℃predhriaty pufer PL1 pre ďalší krok.

4. Nepoužívanie správnej súpravy.

Odporúčanie: Na extrakciu a purifikáciu rastlinnej genómovej DNA použite špeciálnu súpravu na izoláciu rastlinnej DNA.

5. Nesprávne skladovanie Foregene Protease má za následok zníženú alebo inaktivovanú aktivitu.

Odporúčanie: Potvrďte podmienky skladovania Foregene Protease alebo ju nahraďte novou Foregene Proteázou na enzymatickú hydrolýzu.

6. Problém s eluentom

Odporúčanie: Na elúciu použite pufer EB;ak používate ddH₂O alebo iné eluenty, uistite sa, že pH eluentu je medzi 7,0-8,5.

7. Eluent nekvapkal správne

Návrh: Pridajte elučnú kvapku do stredu silikagélovej membrány a nechajte ju pri izbovej teplote 5 minút, aby sa zvýšila efektivita elúcie.

8. Objem eluentu je príliš malý

Návrh: Použite eluent na elúciu genómovej DNA podľa pokynov, aspoň nie menej ako 100μl.

Extrahovaná genómová DNA s nízkou čistotou

Nízka čistota genómovej DNA povedie k zlyhaniu alebo slabému účinku následných experimentov, ako napríklad: enzým nemožno štiepiť a fragment cieľového génu nemožno získať pomocou PCR.

1. Kontaminácia rôznymi proteínmi, kontaminácia RNA.

Analýza: Na premytie kolóny sa nepoužil pufer PW;Pufer PW sa nepoužil na premytie kolóny pri správnej rýchlosti odstreďovania.

Návrh: pokúste sa zabezpečiť, aby nedošlo k zrážaniu v supernatante, keď supernatant prechádza cez kolónu;nezabudnite premyť čistiacu kolónu pufrom PW podľa pokynov a tento krok nemožno vynechať.

2. Znečistenie iónmi nečistôt.

Analýza: Premývacia kolóna Buffer WB bola vynechaná alebo iba raz premytá, čo viedlo k zvyškovej iónovej kontaminácii.

Odporúčanie: Uistite sa, že dvakrát premyjete Buffer WB podľa návodu, aby ste čo najviac odstránili zvyškové ióny.

3. Kontaminácia RNázou.

Analýza: Exogénna RNáza sa pridá k pufru;nesprávna operácia premývania v pufri PW bude mať za následok zvyškovú RNázu a ovplyvní následné experimentálne operácie RNA, ako je in vitro transkripcia.

Návrh: Súpravy na extrakciu nukleových kyselín série Foregene môžu odstrániť RNA bez ďalšej RNázy a všetky činidlá v súprave Plant DNA Isolation Kit nepotrebujú RNázu;nezabudnite premyť čistiacu kolónu pufrom PW podľa pokynov a tento krok nemožno vynechať.

4. Etanolové zvyšky.

Analýza: Po premytí purifikačnej kolóny pufrom WB sa neuskutočnila žiadna centrifugácia v prázdnej skúmavke.

Odporúčanie: Postupujte podľa pokynov pre správnu centrifugáciu prázdnej skúmavky.

Návod na použitie:

Návod na použitie súpravy Plant DNA Isolation Kit