FAQ je preSúprava na izoláciu zvieracej celkovej RNA

Nasledujúca analýza problémov, s ktorými sa môžete stretnúťextrakcia živočíšneho tkaniva/bunky RNA will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.

RNA sa neextrahuje alebo výťažky RNA sú nízke

Často existuje množstvo faktorov, ktoré ovplyvňujú účinnosť regenerácie, ako napríklad: obsah RNA vzorky tkaniva, spôsob operácie, elučný objem atď.

1. Ľadový kúpeľ alebo kryogénna (4 °C) centrifugácia bola vykonaná počas prevádzky.

Odporúčanie: Pracujte pri izbovej teplote (15-25°C) počas celého procesu, nepoužívajte ľadový kúpeľ a odstreďujte pri nízkych teplotách.

2. Nesprávne uchovávanie vzorky alebo príliš dlhý čas skladovania vzorky.

Odporúčanie: Vzorky skladujte pri -80 °C alebo zmrazte v tekutom dusíku a vyhnite sa opakovanému použitiu zmrazovania a rozmrazovania;skúste použiť čerstvé tkanivo alebo kultivované bunky na extrakciu RNA.

3. Nedostatočná lýza vzorky.

Odporúčanie: Pri homogenizácii tkaniva sa uistite, že tkanivo je dostatočne homogenizované a že tkanivové bunky sú dostatočne rozdelené na vysvetlenie uvoľňovania RNA.

4. Eluent nie je pridaný správne.

Odporúčanie: Potvrďte, že ddH bez RNázy₂O sa pridáva po kvapkách do stredu membrány čistiacej kolóny.

5. Do pufra RL2 alebo pufra RW2 sa nepridal správny objem absolútneho etanolu.

Odporúčanie: Postupujte podľa pokynov, pridajte správny objem absolútneho etanolu do pufra RL2 a pufra RW2 a pred použitím súpravy dobre premiešajte.

6. Dávkovanie vzorky tkaniva nie je vhodné.

Odporúčanie: Použite 10-20 mg tkaniva alebo (1-5) × 10⁶buniek na 500 μl pufra RL1, pretože nadmerné používanie tkaniva môže viesť k zníženej extrakcii RNA.

7. Nesprávny elučný objem alebo neúplná elúcia.

Odporúčanie: Elučný objem purifikačnej kolóny je 50-200 μl;ak elučný efekt nie je uspokojivý, odporúča sa predĺžiť čas umiestnenia pri izbovej teplote po pridaní predhriateho ddH bez RNázy₂O, napr. 5-10 min.

8. Čistiaci stĺpec obsahuje etanolový zvyšok po premytí pufrom RW2.

Odporúčanie: Ak po premytí pufra RW2 zostane etanolový zvyšok, odstreďovanie prázdnej skúmavky po dobu 1 minúty, čas operácie odstreďovania prázdnej skúmavky sa môže predĺžiť na 2 minúty alebo sa môže čistiaca kolóna umiestniť na 5 minút pri izbovej teplote, aby sa adekvátne odstránil zvyškový etanol.

Purifikovaná RNA je degradovaná

Kvalita purifikovanej RNA súvisí s faktormi, ako je konzervácia vzorky, kontaminácia RNázou a manipulácia atď.

1. Vzorky tkaniva nie sú uchovávané včas.

Odporúčanie: Ak sa vzorky tkaniva alebo bunky nepoužijú včas po odbere, ihneď ich kryokonzervujte pri -80 °C alebo v tekutom dusíku.Ak chcete extrahovať RNA, vždy, keď je to možné, použite novo odobranú vzorku tkaniva alebo buniek.

2. Opakované zmrazenie a rozmrazenie vzoriek tkaniva.

Odporúčanie: Pri skladovaní vzoriek tkaniva je najlepšie ich rozrezať na malé kúsky kvôli konzervácii a pri použití jeden z nich odstrániť, aby sa predišlo opakovanému zmrazeniu a rozmrazeniu vzorky a degradácii RNA.

3. Počas operácie je zavedená RNáza alebo nepoužívanie jednorazových rukavíc, masiek atď.

Odporúčanie: Experimenty s extrakciou RNA sa najlepšie vykonávajú v oddelených miestnostiach na manipuláciu s RNA a pred experimentom sa stôl vyčistí.

Počas experimentu noste jednorazové rukavice a masky, aby ste minimalizovali degradáciu RNA spôsobenú zavedením RNázy.

4. Reagencie sú počas používania kontaminované RNázou.

Odporúčanie: Vymeňte za novú súpravu na izoláciu zvieracej celkovej RNA pre súvisiace experimenty.

5. Centrifugačné skúmavky, hroty atď. používané pri manipulácii s RNA sú kontaminované RNázou.

Odporúčanie: Uistite sa, že všetky centrifugačné skúmavky, hroty, pipety atď. používané pri extrakcii RNA neobsahujú RNázu.

Purifikovaná získaná RNA ovplyvňuje následné experimenty

RNA purifikovaná na purifikačnej kolóne, ak sú ióny solí, obsah proteínu príliš veľký, ovplyvní následný experiment, ako napríklad: reverzná transkripcia,Northern Blot et al.

1. Eluovaná RNA má zvyšky soľných iónov.

Odporúčanie: Potvrďte, že do pufra RW2 bol pridaný správny objem etanolu a vykonajte 2 premytia kolóny pri odstredivej rýchlosti uvedenej pre operáciu;ak sú prítomné nejaké zvyšky soľných iónov, ponechajte čistiacu kolónu v pufri RW2 počas 5 minút pri teplote miestnosti a vykonajte centrifugáciu, aby ste maximalizovali odstránenie kontaminácie soľou.

2. Etanolový zvyšok v eluovanej RNA.

Odporúčanie: Potvrďte, že po premytí pufra RW2 vykonajte operáciu odstreďovania prázdnej skúmavky pri rýchlosti odstreďovania uvedenej pre prevádzku, predĺžte čas operácie odstreďovania prázdnej skúmavky na 2 minúty, ak sú v ňom ešte zvyšky etanolu, alebo po odstredení prázdnej skúmavky nechajte 5 minút pri izbovej teplote, aby sa maximalizovalo odstránenie zvyškov etanolu.

Izolácia typov vzoriek kyseliny nuceovej

Súpravy na izoláciu RNA od spoločnosti Foregene môžu získať úplnú izoláciu/extrakciu RNA z nasledujúcich zdrojov vzoriek: živočíšne tkanivo, rastlina, bunky, vírus, krv atď.

Ako skladovať súpravu

Skladovanie pri izbovej teplote po dobu 24 mesiacov.