Tipy na zlepšenie obnovy lepidla

1. Zvýšte zaťaženie vzorky počas elektroforézy.

2. Použite čerstvo pripravený elektroforézny pufor.

3. Pri rezaní lepidla sa snažte rezať iba lepidlo pásikmi, aby ste znížili objem rezu lepidla: nepotrebujete lepidlo s niekoľkými účelovými úlomkami, inak to ovplyvní rýchlosť zotavenia.

4. Po roztavení dvoch alebo viacerých kusov lepidla použite trubicu bez ohľadu na to, aký veľký je objem a preneste ju do rovnakého stĺpca.

5. Roztok pridaný do sólu môže byť o niečo viac, čo viac prispieva k naviazaniu DNA na membránu, ale vo všeobecnosti nepresahuje 750 ul.

6. Kľúčom k regenerácii gélu je naviazanie DNA na kolónu prostredníctvom koncentrácie soli, kyslosti (náboja) a hydrofóbnosti roztoku v kolóne.Preto, ak je pH tlmivého roztoku na elektroforézu príliš vysoké, môže sa do sólu pridať 10 ul (pH 5,0, 3 mol/l NaAC);na lepšie zachytenie molekúl DNA na membráne je možné pridať 30% izopropanol na zahriatie do kvapaliny po rozpustení lepidla.

7. Pred pridaním eluentu nechajte kolónu niekoľko minút pri izbovej teplote (asi 10 minút), aby sa etanol úplne odparil.

8. Nakoniec pridajte menej eluentu, aby ste minimalizovali regeneračný objem.Vo všeobecnosti sa na elúciu používa 30-50 μl eluentu (nie príliš málo, inak nebude schopný zvlhčiť membránu, čo nie je vhodné na elúciu);elučné kvapky sú v strede membrány, aby sa úplne vymyla DNA naviazaná na membránu.

9. Po pridaní eluentu je možné ho eluovať vo vodnom kúpeli 55 stupňov po dobu 5 minút alebo umiestniť do vodného kúpeľa s teplotou 50 stupňov na viac ako 10 minút, alebo cez noc uzavrieť parafilmom pri teplote 4 stupňov a následne odstrediť na regeneráciu nasledujúci deň, efekt je dobrý.

10. Odstredený eluát pridajte späť do adsorpčnej kolóny a znova odstreďte.

Podrobné metódy a postupy na získanie produktu PCR

1. Bežná recyklácia gumy

Ak chcete obnoviť lepidlo, je najlepšie použiť súpravu, ktorá je pohodlná a má o niečo vyššiu rýchlosť zotavenia.Ak to naozaj potrebujete obnoviť ručne, môžete po odrezaní lepidla pridať 3-násobok objemu TE.Po roztavení vo vodnom kúpeli sa fenol, fenol/chloroform čisto extrahuje a vyzráža sa etanol.To je všetko.

2. Získavanie DNA z gélov s nízkou teplotou topenia

Purifikácia fragmentov DNA Pridajte TE (10 mmol/l Tris-HCl pH 8,0, 0,1 mmol/l EDTA) zodpovedajúci objemu gélu a vložte do vodného kúpeľa s teplotou 65 °C na 5 minút, aby sa gél úplne rozpustil.

Potom, čo bola privedená na teplotu miestnosti, bolo pridané rovnaké množstvo fenolu (nasýteného TE, TE bol uzavretý v hornej vrstve a spodná vrstva fenolu bola odstránená) a zmes bola jemne premiešaná (nie je potrebné žiadne miešanie) a centrifugovaná pri 12 000 otáčkach za minútu počas 3 minút.Opakujte 1-2 krát.

Odoberte supernatant, pridajte 0,1 objemu 3 mol/l octanu sodného (pH 5,2) a 2,5-násobný objem absolútneho etanolu, aby sa uskutočnilo vyzrážanie etanolom.Purifikovanú DNA rozpustite v príslušnom množstve TE, zmerajte obsah a pripravte na použitie (môže sa použiť na analýzu štruktúry cieľového génu, prípravu sondy atď.).

3. PCR izolácia s dobrou amplifikačnou špecificitou

Ak je špecificita PCR amplifikácie dobrá, ide len o jednoduchú purifikáciu a získanie PCR produktu.K produktu PCR môžete pridať 50 ug/ml proteinázy K, 37 stupňov počas 1 hodiny, extrahovať raz fenolom/chloroformom, raz extrahovať chloroformom a pridať 0,1 objemu supernatantu.Octan sodný sa získal vyzrážaním 2,5 objemami absolútneho etanolu.

Súvisiace produkty:

https://www.foreivd.com/pcr-purification-kit-2-product/

https://www.foreivd.com/blood-superdirecttm-pcr-kit-edta-product/