Koľko toho vieš

O Nextrakcia kyseliny ukleovej

Začiatok a koniec purifikovanej nukleovej kyseliny

Všetko je na začiatku ťažké, najviac je prečistená nukleová kyselina

Začatie molekulárnych experimentov pre následné experimenty

Úspech alebo neúspech má zásadný vplyv.

Stopový/ultrastopový UV spektrofotometer je uprednostňovaný mnohými vedeckými výskumníkmi, pretože dokáže jednoducho, rýchlo a ekonomicky zistiť koncentráciu nukleových kyselín a proteínové a soľné ióny.

Ako všetci vieme, A260 znamená absorbanciu nukleových kyselín, A280 znamená absorbanciu koncentrácie proteínu, A230 znamená absorbanciu koncentrácie iónov soli, takže A260 dokáže previesť koncentráciu nukleovej kyseliny, A260/280 znamená proteínový zvyšok, A260/230 znamená zvyšok soľných iónov, ale je to len veľké množstvo výsledkov merania, ktoré objavili výskumnícikonvenčné“veriť, že môže vysvetliť čistotu DNA a RNAdo určitej miery.Nie je to jediný štandard na identifikáciu výťažku a čistoty nukleových kyselín, používa sa iba ako referenčný a nie je to „zlatý štandard“.

Príručka Thermo Fisher ND-2000 zdôrazňuje spoľahlivosť výsledkov testov

Dôvodom je, že výsledky získané použitím mikro/ultramikro UV spektrofotometra odrážajú výťažok a čistotu nukleovej kyseliny len zboku a existuje veľa faktorov, ktoré ho ovplyvňujú (optická dráha, objem vzorky, koncentrácia vzorky, hodnota pH, iné ióny, ktoré ovplyvňujú meranie absorbancie atď.), nameraná hodnota OD nemusí byť nevyhnutne presná.Súčasne, kvôli nedostatočnej špecifickosti materiálu na stanovenie hodnoty absorbancie, jednovláknová DNA, dvojvláknová DNA, RNA, dNTP a niektoré proteíny majú absorpčné vrcholy pri vlnovej dĺžke 260 nm a koncentrácia určená samotným A260 nie je nevyhnutne skutočná DNA alebo RNA.Koncentráciu a jej integritu a degradáciu nemožno posudzovať.

Ako teda posúdiť kvalitu našej purifikovanej nukleovej kyseliny?Okrem použitia mikro/ultramikro UV spektrofotometra na detekciu sú na vizuálne zobrazenie čistoty a integrity nukleovej kyseliny a na indikáciu koncentrácie do určitej miery potrebné aj metódy, ako je elektroforéza na agarózovom géli.Týmto spôsobom sú výťažok a čistota nukleovej kyseliny získané z výsledkov detekcie rôznych metód dôveryhodné.

Experimentálne porovnanie grafov

Genómová DNA buniek H1299 bola extrahovaná pomocou súprav na extrakciu DNA spoločnosti A a bola pozorovaná významná kontaminácia nečistotami, čo viedlo k vysokým hodnotám OD

(hodnota merania OD a zodpovedajúci elektroferogram)

Hodnotiaci index

Existuje „zlatý štandard“ na testovanie výťažku nukleových kyselín a kvality?

Pokiaľ vieme, jednoduchý, rýchly a lacný spôsob neexistuje.Či už ide o spektrofotometer, gélovú elektroforézu alebo hmotnostnú spektrometriu, všetky odrážajú koncentráciu a čistotu nukleovej kyseliny v roztoku z rôznych hľadísk a je potrebné ich posudzovať na základe vzájomného odkazu.

Najlepší index hodnotenia je vždynásledná experimentálna aplikácia.Neovplyvňuje účinnosť reverznej transkripcie a PCR amplifikácie.Úspešnou extrakciou nukleových kyselín je získanie spoľahlivých amplifikačných produktov a hodnôt Ct a získanie kompletnej sekvencie sekvenovaním.

Aby sme to zhrnuli, pohľad na teóriu len pomeru by mal byť spochybnený názorom „použitie dobrých následných experimentálnych výsledkov ako dobrých extrakčných parametrov“!

Odporúčané súpravy Foregene na extrakciu DNA RNA na získanie vysokej čistoty DNA/RNA:

https://www.foreivd.com/reagent/dna-isolation-series/

https://www.foreivd.com/reagent/rna-isolation-series/