Viesť

Dlhá nekódujúca RNA, lncRNA je nekódujúca RNA s dĺžkou väčšou ako 200 nukleotidov, vo všeobecnosti medzi 200-100 000 nt.lncRNA reguluje génovú expresiu na epigenetickej, transkripčnej a post-transkripčnej úrovni a podieľa sa na umlčaní X chromozómov, imprintingu genómu a modifikácii chromatínu, aktivácii transkripcie, transkripčnej interferencii, nukleárnom transporte, regulácii bunkového cyklu, regulácii bunkovej diferenciácie a efektoch kompenzácie dávky (účinok kompenzácie dávky) a mnohé ďalšie dôležité regulačné procesy v súčasnosti úzko súvisia s výskytom, vývojom a prevenciou ľudských chorôb.

01  Typy a charakteristiky LncRNA

lncRNA je rozdelená do mnohých typov podľa rôznych zdrojov jej tvorby, ako je znázornené na obrázku vyššie.Má nasledujúce vlastnosti:

1. lncRNA sú zvyčajne dlhšie, s dynamickou expresiou a rôznymi spôsobmi zostrihu počas diferenciácie
2. V porovnaní s kódujúcimi génmi má lncRNA zvyčajne nižšiu úroveň expresie
3. Väčšina lncRNA má zjavnú špecifickosť časovej a priestorovej expresie v procese diferenciácie a vývoja tkaniva
4. Existujú charakteristické prejavy v nádoroch a iných ochoreniach
5. Subcelulárne polohy lncRNA sú rôznorodé
6. Postupnosť je nízka z hľadiska zachovania, ale funkcia má určitý stupeň zachovania atď.

02 Často kladené otázky o reverznej transkripcii LncRNA

Kvôli nízkemu obsahu lncRNA v bunkách, dlhej dĺžke a vysokoúrovňovej štruktúre má takáto RNA často zložité štruktúry, ako sú kmeňové slučky alebo vlásenky, a RT-qPCR je náchylná na problémy neúspešnej reverznej transkripcie alebo nízkej účinnosti.

03 Roztok na reverznú transkripciu LncRNA

V ústrednom pravidle sa proces RNA vírusov využívajúcich ich vlastnú reverznú transkriptázu na syntézu DNA pomocou RNA ako templátu nazýva reverzná transkripcia.Proces použitia reverznej transkriptázy RNA vírusu na syntézu cDNA templátu in vitro sa nazýva reverzná transkripcia.Hlavné prvky zahrnuté v systéme reverznej transkripcie: RNA templát, reverzná transkriptáza, priméry a ďalšie zložky.

1.templát RNA

Vplyv templátu RNA na reverznú transkripciu sa odráža v jeho štruktúre, čistote a integrite.Čím vyššia je čistota a integrita extrahovanej RNA, tým vyššia je účinnosť reverznej transkripcie a tým presnejšie sú následné kvantitatívne výsledky.RNA purifikovaná bežne používanými RNA extrakčnými činidlami často obsahuje zvyšky alkoholu a guanidínových solí, ktoré majú silný inhibičný účinok na väčšinu reverznej transkriptázy.

2. Reverzná transkriptáza

Reverzná transkriptáza má kľúčový vplyv na celý systém reverznej transkripcie.Vhodná teplota pre reverznú transkriptázu používanú vo väčšine laboratórií je všeobecne 42 °C.V skutočnosti otvorenie vysokoúrovňovej štruktúry RNA vyžaduje vyššiu teplotu a požiadavky na reverznú transkriptázu sú vyššie.

3.Primer

Priméry reverznej transkripcie zahŕňajú génovo špecifické priméry, náhodné priméry a priméry Oligo dT.Väčšina lncRNA neobsahuje polyA konce a je dôležité správne porovnať náhodné priméry s Oligo dT.

4. Ďalšie komponenty

Vzhľadom na skutočnosť, že RNA je obzvlášť ľahko degradovateľná, je možné minimalizovať zavedenie komponentov do systému reverznej transkripcie, čo môže účinne zabrániť vstupu RNázy a zabezpečiť hladký priebeh reverznej transkripcie.

Foregénzískava z RNA templátu, reverznú transkripciu do qPCR

Komplexne sprevádzajte vašu detekciu lncRNA

Celková RNA zvierat IútechaSúprava (s kolónou na odstránenie gDNA)

Celková RNA bunky IútechaSúprava (s kolónou na odstránenie gDNA)

Lnc-RT HeroTM I (s gDNázou) (Super Premix pre syntézu prvého vlákna cDNA z lncRNA)

Real Time PCR EasyTM-SYBR Green I

Avýhody ofExtrakcia RNA:

Súprava využíva technológiu extrakcie RNA tretej generácie, nie je potrebné používať DNázu.

11 minút z buniek kultivovaných na 96, 24, 12 a 6-jamkových doštičkách, vysokoúčinná extrakcia celkovej bunkovej RNA bez gDNA s vysokou čistotou a vysokou kvalitou.

Výhody reverznej transkripcie lncRNA:

Systém reverznej transkripcie špeciálne vyvinutý pre LncRNA na rýchle odstránenie kontaminácie genómovou DNA.

Systém reverznej transkripcie má vysokú tepelnú stabilitu a stále má dobrú účinnosť reverznej transkripcie pri 50 °C.

Šablóny s vysokým obsahom GC a zložitou sekundárnou štruktúrou je možné obrátiť s vysokou účinnosťou.

Výhodyof qPCR:

Hot start Foregene Taq Polymerase má vyššiu účinnosť amplifikácie, vyššiu amplifikačnú citlivosť a vyššiu amplifikačnú špecifickosť

Vďaka optimalizovanému Real PCR Easy Mix má SYBR Green I vyššiu citlivosť detekcie a jeho intenzita fluorescencie je 3-5 krát vyššia ako u podobných produktov, čo môže spĺňať potreby rôznych typov fluorescenčných kvantitatívnych experimentov.