Budovanie SOP systému

Vytvorte SOP experimentu PCR na štandardizáciu správania personálu experimentu.

Experimentátori prísne dodržiavajú prevádzkové postupy a minimalizujú znečistenie PCR, ktoré môže byť spôsobené ľudským faktorom, alebo zabraňujú vzniku znečistenia v prevádzke.Okrem toho by mal mať experimentátor zodpovedajúce odborné znalosti a zručnosti, vrátane odbornosti na obsluhu súvisiaceho zariadenia, objasnenie celého pracovného procesu, zvládnutie spôsobov úpravy kontaminácie a laboratórnych metód kontroly kvality a schopnosť správne interpretovať výsledky testov.

Budova štandardného laboratória PCR

Laboratórium PCR je v princípe rozdelené do štyroch oblastí, a to oblasť prípravy reagencií, oblasť spracovania vzoriek, oblasť amplifikácie a oblasť analýzy produktu amplifikácie.Prvé dve oblasti sú oblasti pred amplifikáciou a posledné dve oblasti sú oblasti po amplifikácii.Predamplifikačná zóna a poamplifikačná zóna by mali byť prísne oddelené.Experimentálne materiály, činidlá, záznamový papier, perá, čistiace materiály atď. môžu prúdiť len z oblasti pred amplifikáciou do oblasti po amplifikácii, to znamená z oblasti prípravy činidla, oblasti spracovania vzorky, oblasti amplifikácie a oblasti analýzy amplifikačného produktu, a nesmú prúdiť v opačnom smere.Prúd vzduchu v laboratóriu by mal prúdiť aj z oblasti pred amplifikáciou do oblasti po amplifikácii, nie v opačnom smere.

Znížte počet experimentálnych krokov

Ak laboratórium vykonáva iba detekciu a identifikáciu PCR, odporúča sa namiesto klasickej PCR použiť fluorescenčnú kvantitatívnu PCR.

Výsledky fluorescenčnej kvantitatívnej PCR detekcie možno zbierať a analyzovať fluorescenčnými signálmi, takže po reakcii nie je potrebné otvárať veko na elektroforézu, čím sa zabráni kontaminácii produktov PCR spôsobenej únikom reakčných produktov za vzniku aerosólov.Ak zvýšite počet otvorov uzáveru počas kroku zavádzania gélovej elektroforézy, pravdepodobne dôjde ku kontaminácii aerosólom.Odporúča sa podporovať aplikáciu kvantitatívnej PCR a postupne nahradiť kvalitatívnu PCR.

Prijať systém proti znečisteniu UNG

Na PCR reakciu sa používa systém na kontamináciu produktov UNG anti-PCR.

Systém používa dUTP namiesto dTTP.Po PCR reakcii sa všetky produkty PCR (fragmenty DNA) začlenia do dUTP;v ďalšom kole PCR reakcie sa enzým UNG pridaný do systému inkubuje pri 37 °C počas 5 minút pred PCR, ktorá môže byť špecifická. Degradujte všetky fragmenty DNA obsahujúce dUTP a potom vykonajte PCR reakciu.To môže úplne odstrániť aerosólovú kontamináciu spôsobenú produktmi PCR.Účinok je znázornený na obrázku nižšie:

Poznámka: Pre priamu sériu PCR si môžete vybrať sériové produkty systému znečistenia produktov anti-PCR od FJ Biotech

Navrhnite

Pre laboratóriá, ktoré vykonávajú rozsiahle genotypizačné testovanie, sa dôrazne odporúča okrem budovania primeraných laboratórií používať na testovanie reagencií systém kontaminácie produktov UNG anti-PCR.

Pripomienka: Použitie tohto systému nemôže odstrániť kontamináciu produktu PCR, ktorá už bola spôsobená.Preto by sa mal systém UNG použiť na začiatku príslušného testu a systém UNG by sa mal vždy použiť na amplifikáciu PCR, aby sa zabránilo kontaminácii produktov PCR.Falošne pozitívne.

Pri vykonávaní testovania vo veľkom meradle sa odporúča použiť systém Direct PCR-UNG od Forge Biotech, ako napríklad: Plant Leaf Direct PCR Kit-UNG；

Plant Seed Direct PCR Kit-UNG；

Animal Tissue Direct PCR Kit-UNG；

Mouse Tail Direct PCR Kit-UNG；

Zebra Fish Direct PCR Kit-UNG.

Táto séria súprav od Foregene dokáže nielen rýchlo a vo veľkom rozsahu vykonávať detekciu PCR, ale tiež účinne predchádzať a kontrolovať kontamináciu produktov PCR.