Vytvorte SOP experimentu PCR na štandardizáciu správania personálu experimentu.
Experimentátor prísne dodržiava prevádzkové postupy a minimalizuje znečistenie PCR, ktoré môže byť spôsobené ľudským faktorom, alebo predchádza vzniku znečistenia.Okrem toho by mal mať experimentátor zodpovedajúce odborné znalosti a zručnosti, vrátane odbornosti na obsluhu súvisiaceho zariadenia, objasnenie celého pracovného procesu, zvládnutie spôsobov úpravy kontaminácie a laboratórnych metód kontroly kvality a schopnosť správne interpretovať výsledky testov.
Vytvorte štandardné laboratórium PCR.
Laboratórium PCR je v princípe rozdelené do štyroch oblastí, a to oblasť prípravy reagencií, oblasť spracovania vzoriek, oblasť amplifikácie a oblasť analýzy produktu amplifikácie.Prvé dve oblasti sú oblasti pred amplifikáciou a posledné dve oblasti sú oblasti po amplifikácii.Predamplifikačná zóna a poamplifikačná zóna by mali byť prísne oddelené.Experimentálne materiály, činidlá, záznamový papier, perá, čistiace materiály atď. môžu prúdiť len z oblasti pred amplifikáciou do oblasti po amplifikácii, to znamená z oblasti na prípravu činidla → oblasti spracovania vzorky → oblasti amplifikácie → oblasti analýzy amplifikačného produktu, a nesmú prúdiť späť.Prúd vzduchu v laboratóriu by mal prúdiť aj z oblasti pred amplifikáciou do oblasti po amplifikácii a nemal by prúdiť dozadu.Ideálny dizajn laboratória PCR je uvedený nižšie:
Obrázok A: Ideálny režim nastavenia laboratória PCR s negatívnym tlakom v pufrovacej miestnosti
Obrázok B: Ideálny režim laboratórneho nastavenia PCR s pozitívnym tlakom v pufrovacej miestnosti
Schémy nastavenia laboratória PCR uvedené na obrázku A a obrázku B by mali byť ideálnejším režimom nastavenia a laboratórium s podmienkami môže pri návrhu použiť tento režim.Pre bežné laboratóriá sa odporúča, aby sa oblasť amplifikácie PCR a oblasť analýzy produktu dala oddeliť a otvorenie krytu by sa malo čo najviac zmenšiť v oblasti prípravy vzorky a oblasti amplifikácie PCR.Pamätajte: Produkty a experimentálne zásoby v oblasti analýzy produktov sa prísne zakazujú prenášať do oblasti na prípravu vzoriek a do oblasti amplifikácie PCR.
Ak laboratórium vykonáva iba detekciu a identifikáciu PCR, odporúča sa namiesto klasickej PCR použiť fluorescenčnú kvantitatívnu PCR.
Výsledky fluorescenčnej kvantitatívnej PCR detekcie možno zbierať a analyzovať fluorescenčnými signálmi, takže nie je potrebné otvárať veko na elektroforézu po reakcii, čím sa zabráni kontaminácii produktu PCR spôsobenej únikom reakčných produktov za vzniku aerosólov.Ak zvýšite počet otvorov uzáveru počas kroku zavádzania gélovej elektroforézy, pravdepodobne dôjde ku kontaminácii aerosólom.Odporúča sa podporovať aplikáciu kvantitatívnej PCR a postupne nahradiť kvalitatívnu PCR.
Na PCR reakciu sa používa systém na kontamináciu produktov UNG anti-PCR.
Systém používa dUTP namiesto dTTP.Po PCR reakcii sa všetky produkty PCR (fragmenty DNA) začlenia do dUTP;v ďalšom kole PCR reakcie sa enzým UNG pridaný do systému inkubuje pri 37 °C počas 5 minút pred PCR, čo môže špecificky degradovať všetky fragmenty DNA obsahujúce dUTP, a potom sa uskutoční PCR reakcia.To môže úplne odstrániť aerosólovú kontamináciu spôsobenú produktmi PCR.Účinok je znázornený na obrázku nižšie:
Poznámka: Pre priamu sériu PCR si môžete vybrať sériové produkty systému kontaminácie produktov anti-PCR od ForegeneNavrhnite
Pre laboratóriá, ktoré vykonávajú rozsiahle genotypizačné testovanie, sa dôrazne odporúča okrem budovania primeraných laboratórií používať na testovanie reagencií systém kontaminácie produktov UNG anti-PCR.
Pripomienka: Použitie tohto systému nemôže odstrániť kontamináciu produktu PCR, ktorá už bola spôsobená.Preto by sa mal systém UNG použiť na začiatku príslušného testu a systém UNG by sa mal použiť na amplifikáciu PCR, aby sa zabránilo kontaminácii produktov PCR Falošne pozitívne.
Pri vykonávaní testovania vo veľkom meradle, ako napríklad:
Plant Leaf Direct PCR Kit-UNG；
Plant Seed Direct PCR Kit-UNG；
Animal Tissue Direct PCR Kit-UNG；
Mouse Tail Direct PCR Kit-UNG；
Zebra Fish Direct PCR Kit-UNG.
Táto séria súprav od Foregenedokáže nielen rýchlo a vo veľkom rozsahu vykonávať detekciu PCR, ale tiež účinne predchádzať a kontrolovať kontamináciu produktov PCR.
Čas odoslania: 19. marca 2021
