Nasledujúca analýza možných problémov vBuccaltampón/FTA card DNA extraction is helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali:Tech@foregene.com.

Čistiaci stĺpec je upchatý

V tejto súprave sa pri operácii extrakcie genómovej DNA purifikačná kolóna priamo adsorbuje na zmes enzymatickej lýzy vzorky bez kroku centrifugácie a purifikačná kolóna môže byť zablokovaná v dôsledku neúplnej enzymizácie a vysokej viskozity vzorky.

Nasledujúce možné príčiny sú nasledovné:

1. Neúplné enzymatické štiepenie vzoriek tkaniva.

Odporúčanie: Čas spracovania vzorky Foregene Protease možno vhodne predĺžiť alebo supernatant odobrať po centrifugácii pri 12 000 ot./min (~13 400× g) počas 5 minút.

2. Nadmerné používanie vzoriek tkaniva alebo veľkých tkanív.

Odporúčanie: Najlepšie je neprekročiť 1Buccal tampón vo vzorke;ak je vzorka príliš veľká, podľa toho zvýšte dávku pufra ST1, foregenovej proteázy, pufra ST2.

3. Viskozita vzorky je príliš vysoká.

Odporúčanie: Vzorky možno pred extrakciou genómovej DNA vhodne zriediť 10 mM Tris-HCl.

4. Fragmenty krvnej karty boli odsaté.

Odporúčanie: Čas prechodného odstreďovania v kroku 6 extrakcie genómu krvných škvŕn (FTA Card) možno primerane predĺžiť.

Nízky výťažok alebo žiadna DNA

Často existuje množstvo faktorov, ktoré ovplyvňujú výťažok genómovej DNA, vrátane pôvodu vzorky, podmienok skladovania vzorky, prípravy vzorky, manipulácie atď.

Počas extrakcie nie je možné získať genómovú DNA

Možné príčiny sú nasledovné:

1. Nesprávne uchovávanie vzoriek alebo príliš dlhé skladovanie vedie k degradácii genómovej DNA.

Odporúčanie: Z ústnych tampónov by sa mali prednostne odoberať čerstvé vzorky a neodporúča sa používať konzervované tampóny na operácie extrakcie genómovej DNA;vzorky krvných škvŕn by mali zabezpečiť, aby bola kvalita kvalifikovaná a doba skladovania by nemala byť príliš dlhá.

2. Príliš malé využitie tkaniva nemusí viesť k žiadnej extrakcii zodpovedajúcej genómovej DNA.

Odporúčanie: Postupujte podľabuccal v návode na obsluhu otrite pokyny na odber vzoriek a utrite toľkokrát, ako je to možné, aby sa na ústny tampón mohol pripojiť dostatok buniek na extrakciu genómovej DNA;na extrakciu vzorky krvnej škvrny je možné plochu rezu krvnej škvrny primerane zväčšiť.

3. Foregénna proteáza je nesprávne konzervovaná, čo vedie k zníženiu jej aktivity alebo inaktivácii.

Odporúčanie: Potvrďte podmienky skladovaniaForegene Protease alebo ju nahraďte novou Foregene Protease pre enzymatickú reakciu.

4. Nesprávne uchovávanie súpravy alebo doba skladovania je príliš dlhá, čo má za následok zlyhanie niektorých komponentov súpravy.

Odporúčanie: Kúpte si novýBuccal výter DNAizolácia súprava pre súvisiace postupy.

5. Pufer WB nepridáva absolútny etanol.

Odporúčanie: Uistite sa, že tlmivý roztok WB pridáva správny objem absolútneho etanolu.

6. Eluent nie je správne pridaný do silikónového filmu.

Odporúčanie: Pridajte 65°Cpredhriaty eluent klesne do stredu silikónovej membrány a nechá sa 5 minút pri teplote miestnosti, aby sa zvýšila účinnosť elúcie.

Low-yield genomickej DNA izolovaný

Nasledujúce možné príčiny sú nasledovné:

1. Nesprávne uchovávanie vzoriek alebo príliš dlhé skladovanie vedie k degradácii genómovej DNA.

Odporúčanie: Z ústnych tampónov sa prednostne odoberajú čerstvé vzorky a konzervované tampóny by sa nemali používať na extrakciu genómovej DNA.

2. Ak je množstvo vzorky tkaniva príliš malé, obsah extrahovanej genómovej DNA bude nižší.

Odporúčanie: Postupujte podľa pokynov na odber vzoriek z ústneho tampónu v prevádzkovej príručke a utrite ich toľkokrát, koľkokrát je to možné, aby sa na ústny tampón mohol pripojiť dostatok buniek na extrakciu genómovej DNA.

3. Foregénna proteáza je nesprávne konzervovaná, čo vedie k zníženiu jej aktivity alebo inaktivácii.

Odporúčanie: Potvrďte podmienky skladovaniathe Foregénnu proteázu alebo ju vymeňte za novú Foregene Protease pre enzymatickú reakciu.

4. Problémy s eluentmi.

Odporúčanie: Na elúciu použite pufer EB;ak používate ddH₂O alebo iné eluenty, potvrďte, že pH eluátu je medzi 7,0-8,5.

5. Eluát nie je správne pridaný po kvapkách.

Odporúčanie: Pridajte kvapky eluentu do stredu silikónovej membrány a nechajte pri izbovej teplote 5 minút, aby sa zvýšila účinnosť elúcie.

6. Elučná kvapalina sa hromadí príliš málo.

Odporúčanie: Použite eluent na elúciu genómovej DNA aspoň tak, ako je to požadované v pokynochnie menej ako 15μl.

Lach čistota of genómová DNAizolovaný

Nízka čistota genómovej DNA môže viesť k zlyhaniu alebo neuspokojivým výsledkom následných experimentov, ako napríklad: enzýmy nemožno rozrezať, PCR nemôže získať požadovaný génový fragment atď.

Možné príčiny sú nasledovné:

1. Heteroproteínové znečistenie, znečistenie RNA.

Analýza: Purifikačná kolóna nebola premytá použitím pufra PW;Premývacia purifikačná kolóna Buffer PW nebola premytá správnou rýchlosťou odstredenia.

Odporúčanie: Pred pridaním etanolu sa uistite, že v supernatante nie je žiadna zrazenina;nezabudnite premyť čistiacu kolónu podľa pokynov a tento krok nemožno vynechať.

2. Znečistenie iónmi nečistôt.

Analýza: Premývacia kolóna na čistenie pufra WB bola vynechaná alebo bola premytá iba raz, čo viedlo k zvyškovej iónovej kontaminácii.

Odporúčanie: Buffer WB premyte 2-krát podľa pokynov, aby ste čo najviac odstránili zvyškové ióny.

3. Kontaminácia enzýmom RNA.

Analýza: Cudzie RNázy sa pridali do pufra;Operácia premývania pufra PW bola nesprávna, čo viedlo k RNázovým zvyškom, ktoré ovplyvnili následné experimentálne operácie RNA, ako je in vitro transkripcia.

Odporúčanie: Nukleová kyselina série Foregeneisolakity môžu odstrániť RNA bez dodatočného pridania RNázy,teda bukálny tampón/FTA karta na izoláciu DNAneedn't pridať RNázu;určite postupujte podľa pokynov pre premývaciu čistiacu kolónu Buffer PW a tento krok nemožno vynechať.

4. Etanolový zvyšok.

Analýza: Buffer WB nevykonal centrifugáciu v prázdnej skúmavke po premytí purifikačnej kolóny.

Odporúčanie: Vykonajte správnu operáciu odstreďovania prázdnej skúmavky podľa pokynov.

5. Iné znečistenie nečistotami.

Analýza: Uložené vzorky alebo špeciálne vzorky nie sú vopred upravené.

Odporúčanie: Dôkladne predbežne upravte vzorku podľa pokynov.