Úvod:

RNA, vedecký názov ribonukleová kyselina, jej skratka pochádza z RiboNucleic Acid, je typ nukleovej kyseliny vytvorenej spojením najmenej desiatok ribonukleotidov prostredníctvom fosfodiesterových väzieb.

Predpokladom skúmania RNA je extrahovať celkovú RNA bez znečistenia a základný princíp extrakcie RNA možno zhruba zhrnúť takto:

1. Najprv rozrušte bunky

2. Potom odstráňte makromolekulárne nečistoty (proteíny, lipidy, DNA atď.)

3. Nakoniec sa RNA vyzráža, pričom sa odstránia soli a organické rozpúšťadlá a RNA sa ďalej čistí

Minulosť a súčasnosť extrakčnej metódy

Prvou generáciou metódy extrakcie RNA je metóda precipitácie TRIzol (používané činidlá zahŕňajú guanidín izotiokyanát, fenol, chloroform atď.), ktorú vynašli starý otec Piotr Chomczynski a stará mama Nicoletta Sacchi, pretože tento vynález umožňuje extrakciu RNA rýchlo a jednoducho, odvtedy odštartoval rozmach výskumu RNA.

Neskôr dedko predal tento patent spoločnosti Invitrogen a Invitrogen túto metódu spropagoval vo svete a stal sa široko používanou metódou.

Neskôr spoločnosť Invitrogen získala spoločnosť Thermo!

Reprezentatívny produkt: Invitrogen's TRIzol reagent

Metóda zrážania TRIzolom však vyžaduje viacnásobnú precipitáciu a extrakciu RNA a použité činidlá sú toxické a ich pôsobenie trvá dlho.

Preto vznikla druhá generácia kolónovo-enzýmovej purifikačnej metódy s použitím silikagélovej membrány ako špecifického adsorpčného materiálu nukleových kyselín, aby sa maximalizovala výťažnosť RNA vo vzorke a zároveň sa odstránili ďalšie nečistoty.

Metóda druhej generácie zjednodušuje prevádzku na základe stabilného výkonu, znižuje rizikový faktor a zlepšuje efektivitu extrakcie RNA.

Reprezentatívne produkty: QIAGEN RNeasy a väčšina domácich produktov

Metódy prvej aj druhej generácie však vyžadujú použitie DNázy na odstránenie kontaminácie DNA, čo prináša určité nepríjemnosti pre následné následné experimenty.Zvyšková DNáza zníži účinnosť reverznej transkripcie a zníži syntézu prvého vlákna cDNA, čím ovplyvní presnosť výsledkov.

Preto je metóda extrakcie tretej generácie optimalizovaná na základe druhej generácie.Experiment nevyžaduje pridávanie žiadnych enzýmov a RNA sa dá ľahko získať iba pomocou dvoch stĺpcov.

Stĺpec 1: Stĺpec na čistenie DNA na čistenie DNA

Stĺpec 2: Iba RNA Stĺpec špecificky adsorbuje a obnovuje RNA

Takáto jednoduchá operácia nielen šetrí čas, ale tiež uľahčuje obsluhu následných experimentov!

Reprezentatívne produkty: QIAGEN RNeasy Plus aForegeneProdukty série purifikácie RNA

(RNeasy Plus)

(ForegeneSúprava na izoláciu rastlinnej celkovej RNA)

Povedz to potichu!Súprava RNA od Foregene tiež predstavuje super ľahko použiteľný RNase Eraser, ktorý dokáže úplne odstrániť 400 μg RNázy na pevnom povrchu za 1 minútu bez toho, aby do ľudského tela pridával akékoľvek toxické látky!

Obr1: Porovnávacia tabuľka prevádzkových procesov

Produkty Foregene dokážu dokončiť extrakciu RNA iba v dvoch skladbách, nenechajte ostatných žiarliť na váš pokrok v experimente!

Obr2:Eexperimentálne výsledky porovnávacia tabuľka

Prvá generácia (1: TRIzol)

Druhá generácia (2: RNeasy od QIAGEN)

Tretia generácia (3: QIAGEN's RNeasy plus, 4: Foregene)

Obr3: qPCR graf (graf krivky amplifikácie)

Prvá generácia (zelená znamená TRIzol -, červená znamená TRIzol +)

Druhá generácia (nebesky modrá znamená QIAGEN RNeasy-, červená znamená QIAGEN RNeasy +)

Tretia generácia (modrá znamená QIAGEN RNeasy plus, zelená znamená Foregene)

(Poznámka: qPCR graf „-“ znamená, že DNáza nebola pridaná a kontaminácia DNA nebola odstránená. Preto je CT vyššie a výsledok nie je presný; „+“ znamená, že DNáza bola pridaná a kontaminácia DNA bola odstránená, výsledok je presný)

Každý technický upgrade znamená, že prevádzka experimentu sa vyvíja jednoduchším a užívateľsky príjemnejším smerom.

Cieľom Foregene je pomôcť väčšiemu počtu vedeckých výskumníkov ušetriť čas a náklady na experimenty, získať vysokokvalitné experimentálne výsledky a spoločne vytvárať hodnotnejšie výsledky vedeckého výskumu.