-
Podrobný súhrn metódy optimalizácie experimentálneho reakčného systému RT-PCR
一、Zvýšte citlivosť reakčného systému： 1. Izolujte vysokokvalitnú RNA： Úspešná syntéza cDNA pochádza z vysokokvalitnej RNA.Vysokokvalitná RNA by mala byť aspoň v plnej dĺžke a bez inhibítorov reverznej transkriptázy, ako sú EDTA alebo SDS.Kvalita RNA určuje maximálnu...Čítaj viac -
Kompletný návrh PCR primerov a podrobnosti o PCR
Základ návrhu priméru (99 % problémov sa dá vyriešiť) 1. Dĺžka priméru: Učebnica vyžaduje 15-30bp, zvyčajne okolo 20bp.Skutočná podmienka je lepšia 18-24 bp, aby sa zabezpečila špecificita, ale čím dlhší, tým lepší, príliš dlhý primér tiež zníži špecificitu a zníži výťažok.2. Prim...Čítaj viac -
Opatrenia pre qRT-PCR starostlivo zostavené starším lekárom
Každý hovorí o princípe experimentu qRT-PCR, návrhu primeru, interpretácii výsledkov atď., ale myslím si, že by som sa s vami mal podeliť o experimentálne fungovanie qRT-PCR.Je to málo, ale ide o výsledky.Pred vykonaním qRT-PCR musíme jasne pochopiť naše ...Čítaj viac -
Bezpečnostné opatrenia pre RT-qPCR
Experiment RT-qPCR zahŕňa extrakciu RNA a hodnotenie kvality, reverznú transkripciu a qPCR v troch krokoch, pričom každý krok má veľa opatrení, ktoré podrobne predstavíme nižšie.Ⅰ.Hodnotenie kvality RNA V experimente RT-qPCR, po dokončení extrakcie RNA, ...Čítaj viac -
Dôkladný úvod do PCR v reálnom čase
1. Počiatočné pochopenie V tejto fáze musíme pochopiť niektoré pojmy a terminológiu, aby sme predišli chybám pred našimi seniormi, ako napríklad: Otázka: Aký je rozdiel medzi RT-PCR, qPCR, Real-time PCR, a RT-PCR v reálnom čase?Odpoveď: RT-PCR je reverzná transkripčná PCR (reverzná t...Čítaj viac -
PCR, viacnásobná PCR, in situ PCR, reverzná PCR, RT-PCR, qPCR（1）– PCR
PCR, viacnásobná PCR, In situ PCR, Reverzná PCR, RT-PCR, qPCR（1）– PCR Vytriedime si koncepty, kroky a detaily rôznych PCR Ⅰ.PCR Polymerázová reťazová reakcia, označovaná ako PCR, je molekulárna biologická technológia, ktorá sa používa na zväčšenie špecifických fragmentov DNA.Dá sa to považovať za...Čítaj viac -
Experimentálny princíp qRT-PCR
RT-qPCR je vyvinutá z bežnej technológie PCR.Pridáva fluorescenčné chemikálie (fluorescenčné farbivá alebo fluorescenčné sondy) do tradičného reakčného systému PCR a deteguje proces žíhania a predlžovania PCR v reálnom čase podľa ich rôznych luminiscenčných mechanizmov.Fluorescenčný signál...Čítaj viac -
Podrobný súhrn metódy optimalizácie experimentálneho reakčného systému RT-PCR
Ⅰ.Zvýšte citlivosť reakčného systému: 1. Oddeľte vysokokvalitnú RNA: Úspešná syntéza cDNA pochádza z vysokokvalitnej RNA.Kvalitná RNA by mala zabezpečiť aspoň celkovo dlhšie a neobsahuje inhibítory, ktoré neobsahujú záznamové enzýmy, ako je EDTA alebo SDS.Kvalitné...Čítaj viac -
Ako zabezpečiť primeraný rozsah hodnôt Ct pre experimenty qPCR
Hodnota Ct je najdôležitejšou formou prezentácie výsledkov fluorescenčnej kvantitatívnej PCR.Používa sa na výpočet rozdielov v génovej expresii alebo počtu génových kópií.Aká je teda hodnota Ct kvantifikácie fluorescencie považovaná za primeranú?Ako zabezpečiť efektívny rozsah hodnoty Ct?Čo je Ct...Čítaj viac -
Venujte pozornosť nasledujúcim detailom, aby ste zdvojnásobili úspešnosť vášho experimentu RT-qPCR!
RT-qPCR je základným experimentom molekulárnej biológie a každý ho musí poznať.Zahŕňa hlavne tri kroky: extrakciu RNA, reverznú transkripciu do cDNA a fluorescenčnú kvantitatívnu PCR v reálnom čase.Nepomáha, čo sa deje?Je pravdepodobné, že ide o problém s...Čítaj viac -
Extrakcia RNA, 260/230 je obzvlášť nízka a hodnota ct pcr behu je veľmi vysoká.Ako to vyriešiť?
Nízky pomer A260/A230 je zvyčajne spôsobený nečistotami s maximálnou absorpčnou vlnovou dĺžkou 230 nm.Pozrime sa, čo tieto nečistoty zahŕňajú: Bežné znečisťujúce látky Vlnová dĺžka absorpcie Pomerový efekt Proteín ~230nm a 280nm Súčasné zníženie A 260 /A 280 a A 260 /A ...Čítaj viac -
Fluorescenčná kvantitatívna PCR (qPCR) – návrh priméru
V experimentoch qPCR je veľmi dôležitým článkom aj návrh priméru.To, či sú primery vhodné alebo nie, úzko súvisí s tým, či účinnosť amplifikácie dosahuje štandard, či sú amplifikované produkty špecifické a či sú dostupné experimentálne výsledky.Ako teda vyrobiť...Čítaj viac
-
Telefón
-
E-mail
-
Whatsapp
Whatsapp
-
Hore