Súprava na izoláciu celkovej RNA Súpravy na čistenie celkovej RNA z bunky
Popis súpravy:
Vysoko purifikovanú a kvalitnú celkovú RNA je možné získať z rôznych kultivovaných buniek za 11 minút.
Bez RNázy
Prevádzka pri izbovej teplote (15-25 ℃)
So stĺpcom na čistenie DNA
Vysoký výťažok RNA
Rýchlo: Dokončite extrakciu za 11 minút
Bezpečnosť: Žiadne Organické chemikálie
Popis
Táto súprava využíva rotačnú kolónu a formulu vyvinutú spoločnosťou Foregene, ktorá dokáže efektívne extrahovať vysoko čistú a vysokokvalitnú celkovú RNA z buniek kultivovaných v 96, 24, 12 a 6-jamkových platniach.
Súprava poskytuje účinnú kolónu na čistenie DNA, ktorá dokáže ľahko oddeliť supernatant a bunkový lyzát, naviazať a odstrániť genómovú DNA.Obsluha je jednoduchá a časovo nenáročná.
TRNA-only Column dokáže efektívne viazať RNA s jedinečným vzorcom.Súčasne je možné spracovať veľké množstvo vzoriek.
Komponenty súpravy
| Zloženie súpravy | RE-03111 | RE-03114 |
| 50 T | 200 T | |
| Buffer cRL1* | 25 ml | 100 ml |
| Pufer cRL2 | 15 ml | 60 ml |
| Buffer RW1* | 25 ml | 100 ml |
| Buffer RW2 | 24 ml | 96 ml |
| ddH20 bez RNázy | 10 ml | 40 ml |
| RNA-Len stĺpec | 50 | 200 |
| stĺpec na čistenie DNA | 50 | 200 |
| Inštrukcia | 1 | 1 |
*Počas operácie používajte rukavice a vykonajte ochranné opatrenia, pretože pufer cRL1 a pufer RW1 obsahujú dráždivé chaotropné soli.
Vlastnosti a výhody
■ Celý proces prebieha pri izbovej teplote (15-25 °C), bez ľadového kúpeľa a nízkoteplotného odstreďovania.
■ Celá súprava je bez RNázy, netreba sa obávať degradácie RNA.
■ DNA-Cleaning Column špecificky viaže DNA, takže súprava môže odstrániť kontamináciu genómovou DNA bez pridania ďalšej DNázy.
■ Vysoký výťažok RNA: RNA-only Stĺpec a jedinečný vzorec môžu účinne čistiť RNA.
■ Vysoká rýchlosť: jednoduchá obsluha a dá sa dokončiť za 11 minút.
■ Bezpečnosť: Nevyžaduje sa žiadne organické činidlo.
■ Vysoká kvalita: Purifikovaná RNA má vysokú čistotu, neobsahuje proteín a iné nečistoty a môže spĺňať rôzne následné experimenty.
Aplikácia súpravy
Je vhodný na extrakciu a purifikáciu celkovej RNA z kultivovaných buniek v 96, 24, 12 a 6-jamkových platniach.
Pracovný tok
Diagram
Schéma batérie z agarózového gélu súpravy Cell Total RNA Isolation Kit spracovala vyššie uvedené rôzne počty buniek, 20 μl objemová elúcia, vezmite 2 μl purifikovanej celkovej RNA 1 %.
Skladovanie a trvanlivosť
Súpravu možno skladovať 12 mesiacov pri izbovej teplote (15–25 ℃) alebo 2–8 ℃ dlhšie (24 mesiacov).
Pufer cRL1 sa môže skladovať pri 4 °C počas 1 mesiaca po pridaní 2-hydroxy-1-etántiolu (voliteľné).
RNA sa neextrahuje alebo výťažky RNA sú nízke
Často existuje množstvo faktorov, ktoré ovplyvňujú účinnosť regenerácie, ako napríklad: obsah RNA vzorky tkaniva, spôsob operácie, elučný objem atď.
1. Ľadový kúpeľ alebo kryogénna (4 °C) centrifugácia bola vykonaná počas prevádzky.
Odporúčanie: Pracujte pri izbovej teplote (15-25°C) počas celého procesu, nepoužívajte ľadový kúpeľ a odstreďujte pri nízkych teplotách.
2. Nesprávne uchovávanie vzorky alebo príliš dlhý čas skladovania vzorky.
Odporúčanie: Vzorky skladujte pri -80 °C alebo zmrazte v tekutom dusíku a vyhnite sa opakovanému použitiu zmrazovania a rozmrazovania;skúste použiť čerstvé tkanivo alebo kultivované bunky na extrakciu RNA.
3. Nedostatočná lýza vzorky.
Odporúčanie: Pri homogenizácii tkaniva sa uistite, že tkanivo je dostatočne homogenizované a že tkanivové bunky sú dostatočne rozdelené na vysvetlenie uvoľňovania RNA.
4. Eluent nie je pridaný správne.
Odporúčanie: Potvrďte, že ddH bez RNázy2O sa pridáva po kvapkách do stredu membrány čistiacej kolóny.
5. Do pufra RL2 alebo pufra RW2 sa nepridal správny objem absolútneho etanolu.
Odporúčanie: Postupujte podľa pokynov, pridajte správny objem absolútneho etanolu do pufra RL2 a pufra RW2 a pred použitím súpravy dobre premiešajte.
6. Dávkovanie vzorky tkaniva nie je vhodné.
Odporúčanie: Použite 10-20 mg tkaniva alebo (1-5) × 106buniek na 500 μl pufra RL1, pretože nadmerné používanie tkaniva môže viesť k zníženej extrakcii RNA.
7. Nesprávny elučný objem alebo neúplná elúcia.
Odporúčanie: Elučný objem purifikačnej kolóny je 50-200 μl;ak elučný efekt nie je uspokojivý, odporúča sa predĺžiť čas umiestnenia pri izbovej teplote po pridaní predhriateho ddH bez RNázy2O, napr. 5-10 min.
8. Čistiaci stĺpec obsahuje etanolový zvyšok po premytí pufrom RW2.
Odporúčanie: Ak po premytí pufra RW2 zostali zvyšky etanolu, odstreďovanie prázdnej skúmavky po dobu 1 minúty, čas operácie odstreďovania prázdnych skúmaviek sa môže predĺžiť na 2 minúty alebo čistiaca kolóna môže byť umiestnená pri izbovej teplote na 5 minút, aby sa primerane odstránili zvyšky etanol.
Purifikovaná RNA je degradovaná
Kvalita purifikovanej RNA súvisí s faktormi, ako je konzervácia vzorky, kontaminácia RNázou a manipulácia atď.
1. Vzorky tkaniva nie sú uchovávané včas.
Odporúčanie: Ak sa vzorky tkaniva alebo bunky nepoužijú včas po odbere, ihneď ich kryokonzervujte pri -80 °C alebo v tekutom dusíku.Ak chcete extrahovať RNA, vždy, keď je to možné, použite novo odobranú vzorku tkaniva alebo buniek.
2. Opakované zmrazenie a rozmrazenie vzoriek tkaniva.
Odporúčanie: Pri skladovaní vzoriek tkaniva je najlepšie ich rozrezať na malé kúsky kvôli konzervácii a pri použití jeden z nich odstrániť, aby sa predišlo opakovanému zmrazeniu a rozmrazeniu vzorky a degradácii RNA.
3. Počas operácie je zavedená RNáza alebo nepoužívanie jednorazových rukavíc, masiek atď.
Odporúčanie: Experimenty s extrakciou RNA sa najlepšie vykonávajú v oddelených miestnostiach na manipuláciu s RNA a pred experimentom sa stôl vyčistí.
Počas experimentu noste jednorazové rukavice a masky, aby ste minimalizovali degradáciu RNA spôsobenú zavedením RNázy.
4. Reagencie sú počas používania kontaminované RNázou.
Odporúčanie: Vymeňte za novú súpravu na izoláciu zvieracej celkovej RNA pre súvisiace experimenty.
5. Centrifugačné skúmavky, hroty atď. používané pri manipulácii s RNA sú kontaminované RNázou.
Odporúčanie: Uistite sa, že všetky centrifugačné skúmavky, hroty, pipety atď. používané pri extrakcii RNA neobsahujú RNázu.
Purifikovaná získaná RNA ovplyvňuje následné experimenty
RNA purifikovaná na purifikačnej kolóne, ak sú ióny solí, obsah proteínu príliš veľký, ovplyvní následný experiment, ako napríklad: reverzná transkripcia,Northern Blot et al.
1. Eluovaná RNA má zvyšky soľných iónov.
Odporúčanie: Potvrďte, že do pufra RW2 bol pridaný správny objem etanolu a vykonajte 2 premytia kolóny pri odstredivej rýchlosti uvedenej pre operáciu;ak sú prítomné nejaké zvyšky soľných iónov, ponechajte čistiacu kolónu v pufri RW2 počas 5 minút pri teplote miestnosti a vykonajte centrifugáciu, aby ste maximalizovali odstránenie kontaminácie soľou.
2. Etanolový zvyšok v eluovanej RNA.
Odporúčanie: Potvrďte, že po premytí pufra RW2 vykonajte operáciu odstreďovania prázdnej skúmavky pri rýchlosti odstreďovania uvedenej pre prevádzku, predĺžte čas operácie odstreďovania prázdnej skúmavky na 2 minúty, ak sú v nej ešte zvyšky etanolu, alebo ju nechajte 5 pri izbovej teplote. m
