Metódy PCR a kontaminácia aerosólom nukleových kyselín v laboratóriách na testovanie nukleových kyselín sú ako dve strany mince.Môžeme si len vybrať, či to budeme mať alebo nie, ale nemôžeme si vybrať, či to chceme, alebo minúť.

1. Skríning odstraňovača DNA

Aby sa dosiahlo priestorové odstránenie kontaminácie nukleokyselinovým aerosólom, je najprv potrebné skrínovať odstraňovače DNA, ktoré dokážu odstrániť nukleové kyseliny v tekutom stave.Pretože nie je veľa odstraňovačov DNA, ktoré naozaj fungujú.Experimentálnu metódu nájdete v časti: Odstraňovač DNA nemôže byť "tajným kútikom" laboratória!

V tomto experimente sa 100 kópií/μl (CT približne 31) plazmidu ASFV a odstraňovača DNA kvantifikovaných digitálnou PCR zmiešalo v rovnakých objemoch a potom sa nechalo reagovať pri teplote miestnosti 10 minút, 20 minút a 30 minút, v danom poradí.Po extrakcii nukleovej kyseliny sa uskutočnila qPCR amplifikácia.Porovnávala sa pozitívna kontrola zmiešaná s plazmidom a vodou.Keďže experiment nebol ukončený v rovnakom čase, medzi výsledkami môže byť určitá odchýlka, ktorá však neovplyvňuje záver experimentu.Doteraz som hodnotil 10 komerčných produktov na odstraňovanie DNA.Iba produkty č. 1, č. 6 a č. 8 môžu účinne degradovať plazmidovú DNA v kvapalnom stave.Ostatné produkty nemajú takmer žiadny účinok.

Tabuľka 1 Účinok odstraňovania nukleových kyselín komerčne dostupného odstraňovača DNA

2. Experiment odstraňovania DNA bežne používaných dezinfekčných prostriedkov

1. Skríning bežne používaných dezinfekčných prostriedkov

V laboratóriách sa bežne používa mnoho druhov dezinfekčných prostriedkov: aldehydy, fenoly, alkoholy, kvartérne amóniové soli, peroxidy, chlórové prípravky, kyseliny a zásady.Dezinfekčné účinky týchto dezinfekčných prostriedkov na mikroorganizmy boli plne overené experimentmi, neexistujú však dostatočné experimentálne údaje o degradačnom účinku nukleových kyselín.Laboratóriá na testovanie nukleových kyselín potrebujú dezinfekčný prostriedok, ktorý má nielen dobrý dezinfekčný účinok na mikroorganizmy, ale dokáže aj degradovať DNA.Výsledky testov ukazujú, že len dva chlórové prípravky 84 dezinfekčný prostriedok a kyselina trichlórizokyanurová a 1 M kyselina chlorovodíková spĺňajú požiadavky.Keďže 1 M kyselina chlorovodíková je vysoko korozívna, odporúča sa, aby sa chlórové prípravky používali ako odpad v laboratóriách na testovanie nukleových kyselín.Chlórové prípravky sú však korozívne pre kovy a nemožno ich použiť na dezinfekciu nástrojov a zariadení.

Tabuľka 2 Účinky rôznych typov dezinfekčných prostriedkov na odstránenie DNA

2. Minimálna účinná koncentrácia chlórových prípravkov

Dezinfekčné prostriedky na báze chlóru majú silný účinok na degradáciu DNA, ale vzhľadom na ich korozívnosť a dráždivosť kovov ich možno použiť na čistenie podlahy, nekovových pracovných dosiek, namáčacích hrotov, skúmaviek odstredivky a iných testovacích predmetov.

Podľa „Nových technických pokynov na dezinfekciu epidémie koronárnej pneumónie“: Znečisťujúce látky (krv pacientov, sekréty a zvratky) dostupný chlór 5g/L-10g/L dezinfekčný prostriedok obsahujúci chlór;podlahy, steny a povrchy predmetov použite dostupný chlór 1 g/l Chlórový dezinfekčný prostriedok: odevy, posteľná bielizeň a iné textílie sa najprv na 30 minút namočia do chlórového dezinfekčného prostriedku s 0,5 g/l dostupného chlóru a potom sa vyčistia ako obvykle.

Tabuľka 3 Účinok odstraňovania DNA rôznych koncentrácií chlórového dezinfekčného prostriedku

Výsledky testu ukazujú, že: keď je účinná koncentrácia chlóru väčšia alebo rovná 1,2 g/l, dezinfekčný prostriedok obsahujúci chlór môže úplne degradovať 100 kópií/μl plazmidu, keď sa používa 5 minút.Pri 10-minútovom pôsobení môže dezinfekčný prostriedok 84 s účinnou koncentráciou chlóru vyššou alebo rovnou 0,6 g/l úplne degradovať 100 kópií/μl plazmidov.

3. Experiment odstraňovania vzduchu znečisteného aerosólom nukleovej kyseliny

Ako vyčistiť vzduch znečistený aerosólmi nukleových kyselín?Väčšina myšlienok je vytvoriť prostredie kontaminované aerosólom a potom ho vyčistiť, alebo vyčistiť nukleové kyseliny po kontaminácii.Experiment, ktorý sa nedá opakovať a výsledky experimentu sa nedajú kvantitatívne analyzovať, je pre mňa nezmyselný, preto som si požičal niektoré metódy dezinfekčnej dezinfekcie vzduchu.Pozrite si „GB27948-2020 Všeobecné požiadavky na prostriedky na dezinfekciu vzduchu“ a „Technické špecifikácie dezinfekcie“

1. Testovacie materiály

1.1 Odstraňovač DNA: V tomto experimente sa vybrali dva komerčne dostupné odstraňovače DNA 6 a 8 v tabuľke 1.

1.2 Testovací plazmid: Ak vezmeme do úvahy, že hodnota CT väčšiny laboratórnych znečistení bude vyššia ako 30, koncentrácia génového plazmidu ASFV je tentokrát približne 100 kópií/μl a fluorescenčné kvantitatívne PCR CT je približne 31,07.Pridajte plazmid do vločkového vatového tampónu a vysušte na vzduchu.

1.3 Testovací prístroj: Dezinfekčný prístroj Bilingkehan KVBOX, ktorý láskavo podporuje spoločnosť Shenzhen Runlian Environmental Technology Co., Ltd., má vynikajúci výkon pri dezinfekcii vzduchu pomocou dezinfekčného prostriedku na báze peroxidu vodíka a môže účinne zabíjať spóry a iné mikroorganizmy.

1.4 Skúšobný priestor: uzavreté prenosové okno s objemom približne 0,1 kubických metrov.

2. Testovacia metóda

Množstvo dezinfekčného prostriedku nastaveného na dezinfekčnom stroji je 10 ml a koncentrácia je 100 ml/m3, čo je oveľa viac ako „všeobecné požiadavky na dezinfekciu vzduchu GB27948-2020“: pri použití aerosólovej sprejovej dezinfekcie by množstvo dezinfekčného prostriedku malo byť ≤10 ml/m3