Laboratórne testovanie začína odberom vzoriek a odber vzoriek je najjednoduchšie prehliadnuť.Najdôležitejšou vecou pre odber vzoriek je vybrať správny typ vzorky, použiť vhodné nástroje na odber vzoriek a vykonať primeranú prepravu a spracovanie.

I. Typ vzorky

Bežné typy vzoriek sú nasledovné:

Metóda odberu vzoriek môže odkazovať na technické špecifikácie pre environmentálne monitorovanie nového koronavírusu na trhu s poľnohospodárskymi obchodmi (bazár)“:

1. Výter vzoriek z výterov hrdla, rúk, odevov a iných predmetov lekárov: je potrebné použiť roztok na ochranu vírusu v skúmavke na odber vírusu a úplne infiltrovať vatové tampóny na odber vzoriek.Povrch zeme) sa opakovane nanáša a oplachuje viac ako 3-krát.Zároveň je potrebné vykonať viacbodové distribuované vzorkovanie na povrchu vzorkovaného objektu.

2. Vzorky tampónov z povrchu potravín: Vzorky potravín nemožno odoberať priamo.Potraviny, ktoré sa majú odobrať, by sa mali pred odberom vzoriek tampónov starostlivo oddeliť a uložiť do čistého vrecka na odber vzoriek.Po úplnom namočení vzorkovacieho vatového tampónu je potrebné použiť roztok na ochranu vírusov v skúmavke na odber vírusov na opakované rozmazanie a opláchnutie povrchu vzorky potraviny, ktorá sa má odobrať, viac ako 3-krát.Zároveň je potrebné vykonať viacbodové distribuované vzorkovanie na povrchu vzorky.

3. Vzorky odpadových vôd: Podľa distribúcie kanalizačného systému na trhu vyberte 2-3 miesta odberu odpadových vôd so zameraním na vnútorný zber potrubnej siete, po prúde od smeru toku vody alebo na prepojenie s mestskou potrubnou sieťou.Ak chcete odobrať vzorku tampónu, ponorte ju do odpadovej vody pomocou vzorkovacieho vatového tampónu, aby adsorbovala odpadovú vodu, a opláchnite ju v skúmavke na odber viac ako 3-krát.Na odber vzoriek odpadových vôd použite polyetylénové plastové fľaše na odber vzoriek odpadových vôd s objemom 30 – 500 ml;na zber odpadových vôd s objemom väčším ako 500 ml možno použiť polyetylénové plastové vedrá alebo špeciálne zariadenie na obohacovanie vzoriek vody na mieste.Zároveň je potrebné vykonať viacbodový distribuovaný odber vzoriek pre odberné miesto splaškov.

4. Vzorky zvierat: V prípade živých zvierat sa na odber výterov z povrchu tela, orofaryngeálnych výterov a análnych výterov môžu použiť odberové tampóny a vzorky exkrementov alebo sekrétov sa môžu tiež odobrať a zaznamenať na záznamový list.V prípade vzoriek zvierat, ktoré boli stiahnuté z kože atď., použite vatové tampóny na odber vzoriek tampónov z povrchu tela a z telových dutín.Je potrebné použiť roztok na ochranu vírusu v skúmavke na odber vírusov, aby úplne infiltroval vzorkovací vatový tampón a potom zopakovať aplikáciu povrchu vzorky potraviny, ktorá sa má odobrať.Shabu viac ako 3 krát.Zároveň je potrebné vykonať viacbodové distribuované vzorkovanie na povrchu vzorky.

5. Ostatné zariadenia: kontajnery na prepravu a chov zvierat, ako sú klietky alebo akváriá.Najprv pozorujte alebo pochopte konkrétne druhy zvierat skladovaných a chovaných v nádobe a odoberajte vzorky tampónov na vnútornej stene nádoby alebo tekuté vzorky obsahu.

6. Odoberajte vzorky aerosólu v priestoroch, kde sa zhromažďujú ľudia, v zle vetraných miestnych obchodných priestoroch, kanceláriách a oddychových miestnostiach.

II.Nástroje na odber vzoriek
1. Skúmavka na odber krvi
Ak potrebujete urobiť testy nukleových kyselín a vzorky antikoagulancií neskôr, odporúča sa na odber krvi použiť vákuovú krvnú nádobu obsahujúcu antikoagulant EDTA;pre vzorky séra sa odporúča použiť vákuovú krvnú nádobu bez antikoagulantu.

2. Odberový tampón

Odporúča sa používať polypropylénové tampóny namiesto tampónov z alginátu vápenatého alebo tampónov s drevenými tyčami, pretože môžu obsahovať látky, ktoré inaktivujú určité vírusy a inhibujú testovanie PCR.Tampóny s bavlnenou hlavičkou nemožno použiť, pretože bavlnené vlákna majú silnú adsorpciu bielkovín a nie je ľahké ich eluovať do následného konzervačného roztoku.

V „Technických špecifikáciách pre zmiešaný odber a detekciu nových nukleových kyselín koronavírusu 10 v 1“ je jasne stanovené, že „vzorkovací tampón by mal byť vyrobený z polyesteru, nylonu a iných nebavlnených a nevápenatých alginátových materiálov a rukoväť by mala byť vyrobená z nedreveného materiálu.Bod zlomu je asi 3 cm od vrchnej časti tampónovej hlavice, ktorá sa dá ľahko zlomiť.

CDC v Spojených štátoch tiež spomenulo: „Používajte iba tampóny zo syntetických vlákien s plastovými alebo drôtenými driekmi.Nepoužívajte tampóny z alginátu vápenatého alebo tampóny s drevenými driekmi,pretože môžu obsahovať látky, ktoré inaktivujú niektoré vírusy a inhibujú testovanie PCR.

V súčasnosti je široko používaný jednorazový sterilný nylonový vločkovací tampón kombinovaný s plastovou tyčinkou.Vločkovací tampón má lepšiu absorpciu vody a rýchlosť uvoľňovania.Podľa rôznych miest odberu má tampónová hlavica tiež rôzne veľkosti a vlákna.Hrúbka.“

3. Ukážka riešenia na ochranu pri preprave

Konzervačný roztok na inaktiváciu vírusu: vhodné množstvo koncentrácie guanidínovej soli a rôzne zložky vírusovej lýzy môžu priamo lyzovať vírus, aby sa uvoľnila nukleová kyselina, inaktivovala RNáza a DNáza a zabezpečila sa integrita nukleovej kyseliny, ktorá sa môže použiť na následnú detekciu qPCR.Nemožno ho použiť na kultiváciu a izoláciu vírusov.

Roztok na transport a konzerváciu vírusu: obsahuje soli, aminokyseliny, vitamíny, glukózu a bielkoviny potrebné na prežitie vírusu, ktoré dokážu udržať aktivitu vírusu.Môže sa použiť na extrakciu nukleových kyselín a detekciu vírusu v budúcnosti a môže sa použiť aj na kultiváciu a separáciu vírusu.

4. Skúmavka na uchovanie vzorky a vrecko na vzorky

Skúmavka na uchovávanie vzorky by mala byť sterilná plastová skúmavka so skrutkovacím uzáverom, ktorá neadsorbuje nukleovú kyselinu.Každá skúmavka so vzorkou by mala byť zakrytá vreckom na vzorky, aby sa zabránilo úniku a kontaminácii vzorky.

III.Rušivé látky vo vzorke

Rušivé látky v PCR experimentoch

1. endogénny interferent

Látky prítomné vo vzorke tela môžu interferovať s detekciou iných látok.

Krv:hem (>1 mg/ml), hemín (>0,1 ng/μl), triglyceridy, IgG atď.;

moč:močovina (20 mM);

Stolička:rastlinné polysacharidy, cholát;

Tkanivo:proteáza, kolagén;

Mlieko: proteáza, vápenatý ión;

Drogy: antibiotiká, antivírusové lieky, hormóny atď.

iné.

2. exogénny interferenčný

Pochádza z látok, ktoré môžu interferovať s detekciou iných látok in vitro.Prísady do vzoriek a látky, s ktorými sa možno dostať do kontaktu počas odberu a spracovania vzorky:

Testovacie potreby: gél na separáciu séra, nádoba na odber vzoriek a gumená zátka, katéter, tekutina na preplachovanie katétra, prášok na rukavice atď.

Antikoagulant: heparín (>0,1 U/ml), EDTA (>0,5 mM), atď.;

Organické rozpúšťadláizopropanol (>0,1 IU/ml), betaín, dimetylsulfoxid, formamid, glycerín, PEG atď.;

Dezinfekčné prostriedky: alkoholy (etanol>1%), aldehydy, fenoly (fenol>0,2%), peroxidy, silné kyseliny (HCL), silné zásady (NaOH) atď.;

Čistiaci prostriedok:SDS (>0,005 %);

Pôda: Humus

Farbivo: Indigo

iné.

Za skutočných vonkajších podmienok odberu vzoriek, ako je odber vzoriek z prostredia, môžu vzorky obsahovať rôzne interferujúce látky a zloženie interferujúcich látok v každom mieste je iné, čo si vyžaduje, aby sa experimenty s interferenciou PCR vykonávali podľa miestnych podmienok.

IV.Vzorové podmienky skladovania a prepravy

Čerstvo odobraté klinické vzorky by sa mali odoslať do laboratória do 2 až 4 hodín po odbere pri teplote 2 °C až 8 °C.Skladujte pri teplote 4 °C do 24 hodín.Vzorky používané na izoláciu vírusu a detekciu nukleových kyselín by sa mali otestovať čo najskôr.Vzorky, ktoré je možné testovať do 24 hodín, možno skladovať pri teplote 4 °C;Vzorky, ktoré sa nedajú zistiť do 24 hodín, by sa mali uchovávať pri teplote -70 °C alebo nižšej (ak nie - Uchovávajte pri teplote 70 °C v chladničke pri teplote -20 °C).

Zhrnutie:Štandardizovaný odber, preprava a skladovanie vzoriek sú nevyhnutné pre následné testovanie.Falošné negatívy mnohých laboratórnych testov sú spôsobené nesprávnym odberom, prepravou a skladovaním vzoriek, ktoré vedú k degradácii vírusovej nukleovej kyseliny.Mnohé laboratóriá však stále ignorujú dôležitosť odberu vzoriek.Dúfam, že tento článok dokáže prebudiť pozornosť každého k odberu vzoriek a urobiť vedeckejšie a rozumnejšie odbery vzoriek!

Súvisiaci produkt:

Variantná súprava na detekciu nukleových kyselín SARS-CoV-2 (I) (metóda fluorescenčnej sondy multiplex PCR) – na detekciu mutantov z Brazílie, Južnej Afriky a Veľkej Británie