1: Vymeňte experimentálne zásoby včas
Nastavte (NTC) negatívnu kontrolu a opakujte ju mnohokrát.Keď sa v laboratóriu zistí kontaminácia produktu PCR, vymeňte včas všetky experimentálne zásoby.Ako napríklad: znovu nariediť a pripraviť primery, opätovne sterilizovať špičku pipety, EP skúmavku, ddH2O atď., nahradiť novou pipetou a dočasne si zapožičať iné laboratóriá na vykonávanie PCR experimentov.Kontaminované laboratórium musí byť pred pokračovaním v experimente vetrané a ožiarené ultrafialovým žiarením, kým sa neodstráni kontaminácia produktom PCR.
2:Predĺžte čas vystavenia UV žiareniu
Stojí za zmienku, že na odstránenie kontaminácie DNA by sa pravidelné ultrafialové žiarenie malo predĺžiť o 2 hodiny ako zvyčajne.Napriek tomu vplyv UV žiarenia na odstránenie malých fragmentov (pod 200 bp) kontaminácie DNA stále nie je dobrý.
Ultrafialová vlnová dĺžka (nm) je vo všeobecnosti 254/300 nm a stačí ožarovať 30 minút.Treba poznamenať, že pri výbere UV na elimináciu kontaminácie zvyškových produktov PCR by sa mala zvážiť dĺžka produktu PCR a distribúcia báz v sekvencii produktu.UV ožarovanie je účinné len pre dlhé fragmenty nad 500 bp a má malý vplyv na krátke fragmenty.
Počas UV ožarovania budú pyrimidínové bázy v produkte PCR tvoriť diméry.Tieto diméry môžu ukončiť predĺženie, ale nie všetky pyrimidíny v reťazci DNA môžu tvoriť diméry a UV žiarenie môže tiež diméry rozbiť..Stupeň tvorby diméru závisí od vlnovej dĺžky UV žiarenia, typu pyrimidínového diméru a sekvencie nukleotidov susediacich s miestom diméru.Preto, ak sú amplifikované fragmenty PCR malé, odporúča sa použiť systém na kontamináciu produktov UNG anti-PCR.
3:Bežne používané lapače znečistenia DNA
Aerosóly sa ľahko vytvárajú pri pridávaní pipiet, čomu je ťažké sa vyhnúť a rýchlo sa usadia.Preto je nepochybne dobrou voľbou často používať špeciálne lapače znečistenia DNA, aby sa zabránilo šíreniu znečistenia DNA.
4:Použite systém proti znečisteniu UNG
Po odstránení kontaminácie produktom PCR môže testovacie laboratórium použiť systém kontaminácie produktov UNG anti-PCR, aby sa zabránilo kontaminácii produktov PCR.Vo všeobecných laboratóriách môžete vykonávať jednoduché experimentálne oddiely, striktne oddeľovať oblasť produktov PCR od ostatných oblastí, zaviesť určité laboratórne pravidlá a predpisy a vykonávať príslušné školenia, aby ste zabránili výskytu kontaminácie produktov PCR.
Odporúčania: Zriadenie primeraného laboratória PCR, udržiavanie dobrého prostredia PCR, formulovanie štandardných operačných postupov PCR a kultivácia dôsledného operačného povedomia experimentátorov sú kľúčom k prevencii alebo zníženiu znečistenia experimentov PCR.
Čas odoslania: 12. augusta 2021