1: Vymeňte experimentálne zásoby včas

Nastavte (NTC) negatívnu kontrolu a opakujte ju mnohokrát.Keď sa v laboratóriu zistí kontaminácia produktu PCR, vymeňte včas všetky experimentálne zásoby.Ako napríklad: znovu nariediť a pripraviť primery, opätovne sterilizovať špičku pipety, EP skúmavku, ddH2O atď., nahradiť novou pipetou a dočasne si zapožičať iné laboratóriá na vykonávanie PCR experimentov.Kontaminované laboratórium musí byť pred pokračovaním v experimente vetrané a ožiarené ultrafialovým žiarením, kým sa neodstráni kontaminácia produktom PCR.

2：Predĺžte čas vystavenia UV žiareniu

Stojí za zmienku, že na odstránenie kontaminácie DNA by sa pravidelné ultrafialové žiarenie malo predĺžiť o 2 hodiny ako zvyčajne.Napriek tomu vplyv UV žiarenia na odstránenie malých fragmentov (pod 200 bp) kontaminácie DNA stále nie je dobrý.

Ultrafialová vlnová dĺžka (nm) je vo všeobecnosti 254/300 nm a stačí ožarovať 30 minút.Treba poznamenať, že pri výbere UV na elimináciu kontaminácie zvyškových produktov PCR by sa mala zvážiť dĺžka produktu PCR a distribúcia báz v sekvencii produktu.UV ožarovanie je účinné len pre dlhé fragmenty nad 500 bp a má malý vplyv na krátke fragmenty.

Počas UV ožarovania budú pyrimidínové bázy v produkte PCR tvoriť diméry.Tieto diméry môžu ukončiť predĺženie, ale nie všetky pyrimidíny v reťazci DNA môžu tvoriť diméry a UV žiarenie môže tiež diméry rozbiť..Stupeň tvorby diméru závisí od vlnovej dĺžky UV žiarenia, typu pyrimidínového diméru a sekvencie nukleotidov susediacich s miestom diméru.Preto, ak sú amplifikované fragmenty PCR malé, odporúča sa použiť systém na kontamináciu produktov UNG anti-PCR.

3：Bežne používané lapače znečistenia DNA

Aerosóly sa ľahko vytvárajú pri pridávaní pipiet, čomu je ťažké sa vyhnúť a rýchlo sa usadia.Preto je nepochybne dobrou voľbou často používať špeciálne lapače znečistenia DNA, aby sa zabránilo šíreniu znečistenia DNA.

4：Použite systém proti znečisteniu UNG

Po odstránení kontaminácie produktom PCR môže testovacie laboratórium použiť systém kontaminácie produktov UNG anti-PCR, aby sa zabránilo kontaminácii produktov PCR.Vo všeobecných laboratóriách môžete vykonávať jednoduché experimentálne oddiely, striktne oddeľovať oblasť produktov PCR od ostatných oblastí, zaviesť určité laboratórne pravidlá a predpisy a vykonávať príslušné školenia, aby ste zabránili výskytu kontaminácie produktov PCR.

Odporúčania: Zriadenie primeraného laboratória PCR, udržiavanie dobrého prostredia PCR, formulovanie štandardných operačných postupov PCR a kultivácia dôsledného operačného povedomia experimentátorov sú kľúčom k prevencii alebo zníženiu znečistenia experimentov PCR.