W:Brother, reverzná transkripcia je dokončená a nakoniec posledný krok – fluorescenčná kvantitatívna PCR!Hej, brat, čo je to kvantitatívna PCR v reálnom čase?
M:PCR vždy viete, však?
W: Viete, PCR je polymerázová reťazová reakcia a je to technológia, ktorá zvyšuje DNA!
M: Je to takmer... Je to technická metóda na amplifikáciu cieľovej sekvencie viac ako miliónkrát prostredníctvom špecifických primérov, ale to len indikuje prítomnosť alebo neprítomnosť cieľovej sekvencie a nemôže určiť množstvo počiatočného templátu.Fluorescenčná kvantitatívna PCR je technická metóda vyvinutá na riešenie tohto problému.PCR v reálnom čase a kvantitatívne PCR (qPCR) sa na to všeobecne vzťahujú.
W: Rozdiel od bežnej PCR spočíva v kvantifikácii fluorescencie?
M: Áno, to znamená, že v štádiu predlžovania každého cyklu PCR sa deteguje intenzita fluorescenčného signálu a počiatočné množstvo templátu sa môže vypočítať podľa zmeny intenzity signálu.
W: Je to také zložité!Musím si to vypočítať sám?
M: To si vyžaduje, aby ste sa učili pomaly, najlepšie je pochopiť princíp.Teraz sa môžete najskôr zamerať na hodnotu CT, čo sú relatívne intuitívne experimentálne údaje a ich veľkosť zodpovedá veľkosti počiatočného množstva šablóny.Nechýbajú ani grafy ako krivky zosilnenia a krivky topenia.Oni majú posledné slovo o tom, či je váš experiment úspešný alebo nie.
W: Oh, brat.Potom urobím experiment qPCR!
M: Venujte zvláštnu pozornosť tomu, aby ste do oblasti s činidlami nepridávali šablóny, inak sa vaša nepoužitá zmes ľahko kontaminuje!
W: Chápem!

Real Time PCR Easyᵀᴹ-SYBR Green I Kit

Vyššia účinnosť, väčšia špecifickosť
Vysoká citlivosť, dobrá kompatibilita