• Facebook
  • linkedin
  • YouTube

Protilátky, tiež nazývané imunoglobulíny (Ig), sú glykoproteíny, ktoré sa špecificky viažu na antigény.
 
Bežný protilátkový prípravok sa vyrába imunizáciou zvierat a odberom antiséra.Preto antisérum zvyčajne obsahuje protilátky proti iným nepríbuzným antigénom a iným proteínovým zložkám v sére.Všeobecné molekuly antigénu väčšinou obsahujú viacero rôznych epitopov, takže konvenčné protilátky sú tiež zmesou protilátok proti viacerým rôznym epitopom.Dokonca aj konvenčné sérové ​​protilátky namierené proti rovnakému epitopu sú stále zložené z heterogénnych protilátok produkovaných rôznymi B bunkovými klonmi.Preto sa konvenčné sérové ​​protilátky nazývajú aj polyklonálne protilátky alebo skrátene polyklonálne protilátky.
 
Monoklonálna protilátka (monoklonálna protilátka) je vysoko jednotná protilátka produkovaná jedným B bunkovým klonom a namierená iba proti špecifickému epitopu.Zvyčajne sa pripravuje hybridómovou technológiou - technológia hybridómových protilátok je založená na technológii bunkovej fúzie, ktorá kombinuje B bunky so schopnosťou vylučovať špecifické protilátky a myelómové bunky s nekonečnou rastovou kapacitou do B-bunkových hybridómov.Táto hybridómová bunka má vlastnosti rodičovskej bunky.Môže proliferovať donekonečna a nesmrteľne in vitro ako myelómové bunky a môže syntetizovať a vylučovať špecifické protilátky, ako sú slezinové lymfocyty.Prostredníctvom klonovania možno získať monoklonálnu líniu odvodenú z jedinej hybridómovej bunky, to znamená hybridómovú bunkovú líniu.Protilátky, ktoré produkuje, sú vysoko homogénne protilátky proti rovnakému antigénnemu determinantu, to znamená monoklonálne protilátky.
 
Protilátky existujú ako jeden alebo viacero monomérov tvaru Y (tj monoklonálne protilátky alebo polyklonálne protilátky).Každý monomér v tvare Y sa skladá zo 4 polypeptidových reťazcov, vrátane dvoch identických ťažkých reťazcov a dvoch identických ľahkých reťazcov.Ľahký reťazec a ťažký reťazec sú pomenované podľa ich molekulovej hmotnosti.Vrcholom štruktúry v tvare Y je variabilná oblasť, ktorá je väzbovým miestom pre antigén.(Výňatok z konceptu Detai Bio-Monoklonal Antibody Concept)
 
Štruktúra protilátky
1Ťažká reťaz
Existuje päť typov ťažkých reťazcov cicavčích Ig, ktoré sú pomenované gréckymi písmenami α, δ, ε, γ a μ.Zodpovedajúce protilátky sa nazývajú IgA, IgD, IgE, IgG a IgM.Rôzne ťažké reťazce sa líšia veľkosťou a zložením.α a γ obsahujú približne 450 aminokyselín, zatiaľ čo μ a ε obsahujú približne 550 aminokyselín.
Každý ťažký reťazec má dve oblasti: konštantnú oblasť a variabilnú oblasť.Všetky protilátky rovnakého typu majú rovnakú konštantnú oblasť, existujú však rozdiely medzi protilátkami rôznych typov.Konštantné oblasti ťažkých reťazcov y, a a 5 sú zložené z troch Ig domén v tandeme, s pántovou oblasťou na zvýšenie ich flexibility;konštantné oblasti ťažkých reťazcov μ a ε sú zložené zo 4 Ig domén.Variabilná oblasť ťažkého reťazca protilátky produkovanej rôznymi B bunkami je odlišná, ale variabilná oblasť protilátky produkovanej rovnakou B bunkou alebo bunkovým klonom je rovnaká a variabilná oblasť každého ťažkého reťazca je dlhá približne 110 aminokyselín., A tvoria jednu Ig doménu.
 
Svetelná reťaz
U cicavcov existujú iba dva typy ľahkých reťazcov: typ lambda a typ kappa.Každý ľahký reťazec má dve spojené domény: konštantnú oblasť a variabilnú oblasť.Dĺžka ľahkého reťazca je približne 211 až 217 aminokyselín.Dva ľahké reťazce obsiahnuté v každej protilátke sú vždy rovnaké.Pre cicavce má ľahký reťazec v každej protilátke iba jeden typ: kapa alebo lambda.U niektorých nižších stavovcov, ako sú chrupavkovité ryby (chrupavkové ryby) a kostnaté ryby, sa nachádzajú aj iné typy ľahkých reťazcov, ako napríklad typ iota (iota).
 
Fab a Fc segmenty
Fc segment sa môže priamo kombinovať s enzýmami alebo fluorescenčnými farbivami na označenie protilátok.Je to časť, kde sa protilátka nituje na platni počas procesu ELISA, a je to tiež časť, kde je druhá protilátka rozpoznaná a naviazaná pri imunoprecipitácii, imunoblote a imunohistochémii.Protilátky môžu byť hydrolyzované na dva F(ab) segmenty a jeden Fc segment proteolytickými enzýmami, ako je papaín, alebo môžu byť odlomené z pántovej oblasti pepsínom a hydrolyzované na jeden F(ab)2 segment a jeden Fc segment.Fragmenty IgG protilátok sú niekedy veľmi užitočné.Kvôli nedostatku Fc segmentu sa F(ab) segment nebude vyzrážať s antigénom, ani nebude zachytený imunitnými bunkami v in vivo štúdiách.Kvôli malým molekulárnym fragmentom a nedostatku sieťovacej funkcie (kvôli nedostatku Fc segmentu) sa Fab segment zvyčajne používa na rádioaktívne značenie vo funkčných štúdiách a Fc segment sa používa hlavne ako blokujúce činidlo pri histochemickom farbení.
 
Variabilné a konštantné oblasti
Variabilná oblasť (V oblasť) sa nachádza v 1/5 alebo 1/4 (obsahuje približne 118 aminokyselinových zvyškov) H reťazca blízko N-konca a 1/2 (obsahuje približne 108-111 aminokyselinových zvyškov) v blízkosti N-konca L reťazca.Každá V oblasť má peptidový kruh tvorený vnútroreťazcovými disulfidovými väzbami a každý peptidový kruh obsahuje približne 67 až 75 aminokyselinových zvyškov.Zloženie a usporiadanie aminokyselín vo V oblasti určuje väzbovú špecificitu protilátky pre antigén.V dôsledku neustále sa meniacich typov a sekvencií aminokyselín vo V oblasti sa môže vytvoriť mnoho druhov protilátok s rôznymi väzbovými antigénovými špecificitami.V oblasti L reťazca a H reťazca sa nazývajú VL a VH.Vo VL a VH má zloženie aminokyselín a sekvencia niektorých lokálnych oblastí vyšší stupeň variácií.Tieto oblasti sa nazývajú hypervariabilné oblasti (HVR).Aminokyselinové zloženie a usporiadanie ne-HVR častí vo V oblasti sú relatívne konzervatívne, čo sa nazýva rámcová oblasť.Vo VL sú tri hypervariabilné oblasti, zvyčajne umiestnené na aminokyselinových zvyškoch 24 až 34 a 89 až 97, v tomto poradí.Tri HVR VL a VH sa nazývajú HVR1, HVR2 a HVR3.Výskum a analýza röntgenovej kryštálovej difrakcie dokázala, že hypervariabilná oblasť je skutočne miestom, kde sa viaže antigén protilátky, preto sa nazýva oblasť určujúca komplementaritu (CDR).HVR1, HVR2 a HVR3 z VL a VH sa môžu nazývať CDR1, CDR2 a CDR3.Vo všeobecnosti má CDR3 vyšší stupeň hypervariability.Hypervariabilná oblasť je tiež hlavným miestom, kde existujú idiotypické determinanty molekúl Ig.Vo väčšine prípadov hrá H reťazec dôležitejšiu úlohu vo väzbe na antigén.
2konštantná oblasť (oblasť C)sa nachádza v 3/4 alebo 4/5 (približne od aminokyseliny 119 po C koniec) H reťazca blízko C konca a 1/2 (obsahuje asi 105 aminokyselinových zvyškov) v blízkosti C konca L reťazca.Každá funkčná oblasť H reťazca obsahuje približne 110 aminokyselinových zvyškov a obsahuje peptidový kruh zložený z 50-60 aminokyselinových zvyškov spojených disulfidovými väzbami.Zloženie aminokyselín a usporiadanie tejto oblasti sú relatívne konštantné v rovnakom reťazci izotypu L živočíšneho Ig a v rovnakom reťazci H typu.To isté, môže sa len špecificky viazať na zodpovedajúci antigén, ale štruktúra jeho C oblasti je rovnaká, to znamená, že má rovnakú antigenicitu.Konská anti-ľudská IgG sekundárna protilátka (alebo anti-protilátka) môže byť kombinovaná s dvomi A kombinácia protilátok (IgG) proti rôznym exotoxínom.Toto je dôležitý základ pre prípravu sekundárnych protilátok a aplikáciu fluoresceínu, izotopov, enzýmov a iných značených protilátok.
 
 
Súvisiace produkty:
Súprava Cell Direct RT-qPCR

 

 


Čas odoslania: 30. septembra 2021